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組胺檢測(cè)

• 發(fā)布日期：2016/9/20 15:55:17 閱讀次數(shù)：1525

• 組胺是魚(yú)體中游離組氨酸在組氨酸脫羧酶催化下，發(fā)生脫羧反應(yīng)而形成的一種胺類。魚(yú)體中組胺含量與細(xì)菌污染魚(yú)體中組胺脫羧酶活力呈正相關(guān)。組胺檢測(cè)方法一般用偶氮反應(yīng)分光光度法。下面就介紹偶氮反應(yīng)分光光度法。

  1．儀器

  分光光度計(jì)。

  2．試劑

  ①5％Na₂CO₃液。

  ②25％NaOH液。

  ③正戊醇。

  ④10％三氯乙酸液。

  ⑤偶氮試劑：a．稱取對(duì)硝基苯胺0．5g，HCI5mL溶解，用水定容至200mL，置冰箱中。b．稱取NaNO₂0．5g，水溶解并定容至100mL。臨用前，將a液5m與b液40mL混合后立即使用。

  ⑥組胺標(biāo)準(zhǔn)貯存液(1mg·m L ^-1)：準(zhǔn)確稱取于105℃烘烤2h的磷酸組胺0．2767g，溶于水，并定容至100m L。

  ⑦組胺標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(20μg·m L ^-1)。

  3．標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

  吸取組胺標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(20μg·m L ^-1)0.0mL、0．2mL、0．4mL、0．6mL、0．8m L、1．0mL，分別于10m L比色管中，各加l mol·L ^-1HCl1m L、5％Na₂CO₃液3m L偶氮試劑3mL，用水定容至10mL，混勻，10min后用1cm比色皿，于波長(zhǎng)480nm處測(cè)吸光度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  4．檢測(cè)

  準(zhǔn)確稱取16g樣品于具塞錐形瓶中，加30m L10％三氯乙酸，浸泡3h，10％三氯乙酸定容至50mL，過(guò)濾，取lmL濾液于分液漏斗中，用25％NaOH液調(diào)呈堿性，加正戊醇3m L，振搖5min，靜置分層，正戊醇收于10m L比色管中，重復(fù)3次，合并正戊醇，并定容至刻度，取正戊醇提取液lm L于另一分液漏斗中，用1 mol·L ^-1HCl3mL×3，分3次提取，合并HCl于10mL比色管中，并定容至刻度。

  取HCl提取液lmL于另一10m L比色管中加5％Na₂CO₃液3mL、偶氮試劑3mL，用水定容至10mL，混勻，放10min，用1cm比色皿，空白管調(diào)零，于波長(zhǎng)480nm處測(cè)吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣品被測(cè)液中組胺含量。

  5．計(jì)算

  X=（C_S*100）/[m*(1/V₁)*(1/10)*(1/10)*1000]

  式中：X——食品中組胺含量，mg·(100g) ^-1；

  C_S一一樣液吸光度查標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)應(yīng)組胺含量，μg；

  m——樣品質(zhì)量，g；

  V₁——樣品總體積，mL。

  6．說(shuō)明

  ①用三氯乙酸除樣液中蛋白質(zhì)要徹底。

  ②在組胺標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液制備標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，分別加1mol·L ^-1HCllmL，而樣品HCl提取液中，不應(yīng)再加了，否則HCl過(guò)量會(huì)使結(jié)果偏低。