在光度分析中,為了減小誤差,使分析測定有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度,除了注意選擇和控制適當(dāng)?shù)娘@色條件外,還要注意選擇適當(dāng)?shù)墓舛葴y量條件。光度測量條件的選擇,可以從以下幾個方面考慮。
一、選擇合適波長的入射光
為使測定有較高的靈敏度,一般情況下,入射光的波長應(yīng)根據(jù)吸收曲線,選擇被測溶液有最大吸收的單色光,即人射光的波長應(yīng)為λmax,因為在λmax處,摩爾吸光系數(shù)ε最大,測定靈敏度較高,測定結(jié)果較為準(zhǔn)確。如果最大吸收波長不在儀器可測波長范圍之內(nèi),或干擾物質(zhì)在此波長處有較大吸收,則應(yīng)選用靈敏度較低并能避免干擾的單色光作為入射光。如果試液中含有最大吸收波長不同的多種組分,可以不經(jīng)分離,通過改變最大吸收波長進(jìn)行連續(xù)測定。但要注意:被測的組分必須互相不起化學(xué)反應(yīng);每一組分必須在某一波長范圍內(nèi)遵循朗伯一比耳定律;在任一波長,溶液的吸光度為各組分吸光度之和。
二、控制吸光度的讀數(shù)范圍
從光度測量誤差考慮,為了使測定有較高的準(zhǔn)確度,減少讀數(shù)誤差,被測物質(zhì)的吸光度應(yīng)控制在0.2~0.8的范圍內(nèi),為此可采取以下措施:
①通過控制試樣的稱取量或采用萃取、富集等手段,控制標(biāo)準(zhǔn)溶液和被測試液的濃度,從而調(diào)節(jié)吸光度的大小。
②通過改變比色皿的厚度,調(diào)節(jié)溶液吸光度的大小。
三、選擇合適的參比溶液
參比溶液的作用是調(diào)節(jié)儀器工作的零點,另外,選擇合適的參比溶液可以消除由于比色皿、溶劑及試劑對入射光的反射和吸收等帶來的誤差。參比溶液的選擇是光度測量的重要條件之一。選擇適當(dāng)參比溶液的原則是:
①當(dāng)被測試液、顯色劑及所用其他試劑均無顏色,即它們在測定波長處都無吸收時,可用蒸餾水作參比溶液。
②如果顯色劑有顏色而被測試液為無色時,可用不加被測試液的顯色劑溶液作參比溶液。
③如果顯色劑為無色,而被測試液中存在其他有色離子,可用不加顯色劑的被測試液作參比溶液。
④如果顯色劑和被測試液均有顏色,可將一份試液加入適當(dāng)?shù)难诒蝿?,將被測組分掩蔽起來,使之不再與顯色劑作用,而顯色劑和其他試劑均按操作步驟加入,以此作為參比溶液,這樣可以消除顯色劑和一些共存組分的干擾。
總之,要求測量時選用的參比溶液,能盡量使測得試液的吸光度真正反映待測物質(zhì)的濃度。