一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
1．掌握吸光光度法測(cè)磷的原理和方法。
2．熟悉721型或722型分光光度計(jì)的使用方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
微量磷的測(cè)定，一般采用鉬藍(lán)法。此法是在含PO43-的酸性溶液中加入(NH4)2MoO4試劑，可生成黃色的磷鉬酸，其反應(yīng)式如下：
PO43- +12MoO42-+27H+＝H7[P(Mo2O7)6]+10H2O
若以此直接比色或分光光度法測(cè)定，靈敏度較低，適用于含磷量較高的試樣。如在黃色溶液中加入適量還原劑，磷鉬酸中部分正六價(jià)鉬被還原生成低價(jià)的藍(lán)色的磷鉬藍(lán)，提高了測(cè)定的靈敏度，還可消除Fe3十等的干擾。經(jīng)顯色后要在690nm波長下測(cè)定其吸光度。含磷的質(zhì)量濃度在1mg?L-1以下服從朗伯一比耳定律。
最常用的還原劑有SnCl2和抗壞血酸。用SnCl2作為還原劑，反應(yīng)的靈敏度高、顯色快。但藍(lán)色穩(wěn)定性差，對(duì)酸度、(NH4)2MoO4試劑的濃度控制要求比較嚴(yán)格?？箟难岬闹饕獌?yōu)點(diǎn)是顯色較穩(wěn)定，反應(yīng)的靈敏度高、干擾小，反應(yīng)要求的酸度范圍寬[c(H+)=0.48~1.44mol?L-1，以c(H+)=0.8mol?L-1為宜〕，但反應(yīng)速率慢。為加速反應(yīng)，可加入酒石酸銻鉀，配制成（NH4)2MoO4、酒石酸銻鉀和抗壞血酸的混合顯色劑（此稱鉬銻抗法）。本實(shí)驗(yàn)采用SnCl2法。
SiO32-會(huì)干擾磷的測(cè)定，它也與（NH4)2MoO4生成黃色化合物，并被還原為硅鉬藍(lán)。但可用酒石酸來控制MoO2-4濃度，使它不與SiO2-3發(fā)生反應(yīng)。
該法可適用于磷酸鹽的測(cè)定，還可適用于土壤、磷礦石、磷肥等全磷的分析。
三、儀器和試劑
儀器：721型（或722型）分光光度計(jì)、容量瓶（50mL)、吸量管（(5mL,10mL)。
試劑：(NH4)2MoO4-H2SO4混合液[1]、SnCl2-甘油溶液［2]、磷標(biāo)準(zhǔn)溶液5mg·L-1。
四、操作步驟
1．工作曲線的繪制分別取0.00,2.00,4.00,6.00,8.00,10.00mL5mg?L-1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液于編號(hào)后的6個(gè)50mL容量瓶中，各加入約25mL H2O。然后再加入2.5mL(NH4)2MoO4-H2SO4混合試劑，搖勻。然后各加入4滴SnCl2-甘油溶液，用H2O稀釋至刻度，充分搖勻，靜置10一12min。
于690nm波長處，用1.5cm比色皿以空白溶掖作參比，調(diào)節(jié)分光光度計(jì)的透光度為100(吸光度為0),測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。
以吸光度A為縱坐標(biāo)，磷的質(zhì)量濃度ρ(P)為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。
2．試液中磷含量的測(cè)定取10.00mL試液于50mL容量瓶中，與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同條件下顯色，并測(cè)定其吸光度。從工作曲線上查出相應(yīng)磷的含量，并計(jì)算原試液的質(zhì)量濃度（單位為mg·L-1)。
