一、原理
試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，采用相應(yīng)的方法提取和凈化，以氫氧化鉀溶液為淋洗液，陰離子交換柱分離，電導(dǎo)檢測器檢測。以保留時間定性，外標(biāo)法定量。
二、試劑和材料
（1）超純水：電阻率＞18.2MΩ·cm。
(2）乙酸（CH3COOH)：分析純。
(3）氫氧化鉀（KOH)：分析純。
(4）乙酸溶液（3％）：量取乙酸（2.2)3mL于100mL容量瓶中，以水稀釋至刻度，混勻。
(5)亞硝酸根離子（NO-2）標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg/L，水基體）。
(6)硝酸根離子（NO-3）標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000mg/L，水基體）。
(7)亞硝酸鹽（以NO-2計，下同）和硝酸鹽（以NO-3計，下同）混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確移取亞硝酸根離子（NO-2）和硝酸根離子（N-3)的標(biāo)準(zhǔn)溶液各l.0mL于100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，此溶液每1L含亞硝酸根離子1.0mg和硝酸根離子10.0mg。
三、儀器和設(shè)備
(1)離子色譜儀：包括電導(dǎo)檢測器，配有抑制器，高容量陰離子交換柱，50μL定量環(huán)。
(2）食物粉碎機。
(3）超聲波清洗器。
(4）天平：感量為0.1mg和1mg。
(5)離心機：轉(zhuǎn)速≧10000轉(zhuǎn)／分鐘，配5mL或10mL離心管。
(6)0.22μm水性濾膜針頭濾器。
(7）凈化柱：包括C18柱、Ag柱和Na柱或等效柱。
(8）注射器：1.0mL和2.5mL。
注：所有玻璃器皿使用前均需依次用2mol/L氫氧化鉀和水分別浸泡4h，然后用水沖洗3一5次，晾干備用。
四、分析步驟
4.1試樣預(yù)處理
(1)新鮮蔬菜、水果：將試樣用去離子水洗凈，晾干后，取可食部切碎混勻。將切碎的樣品用四分法取適量，用食物粉碎機制成勻漿備用。如需加水應(yīng)記錄加水量。
(2）肉類、蛋、水產(chǎn)及其制品：用四分法取適量或取全部，用食物粉碎機制成勻漿備用。
(3）乳粉、豆奶粉、嬰兒配方粉等固態(tài)乳制品（不包括干酪）：將試樣裝入能夠容納2倍試樣體積的帶蓋容器中，通過反復(fù)搖晃和顛倒容器使樣品充分混勻直到使試樣均一化。
(4）發(fā)酵乳、乳、煉乳及其他液體乳制品：通過攪拌或反復(fù)搖晃和顛倒容器使試樣充分混勻。
(5）干酪：取適量的樣品研磨成均勻的泥漿狀。為避免水分損失，研磨過程中應(yīng)避免產(chǎn)生過多的熱量。
4.2提取
(1)水果、蔬菜、魚類、肉類、蛋類及其制品等：稱取試樣勻漿5g（精確至0.01g，可適當(dāng)調(diào)整試樣的取樣量，以下相同），以80mL水洗入100mL容量瓶中，超聲提取30min，每隔5min振搖一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min，取出放置至室溫，加水稀釋至刻度。溶液經(jīng)濾紙過濾后，取部分溶液于10000轉(zhuǎn)／分鐘離心15min，上清液備用。
(2）腌魚類、腌肉類及其他腌制品：稱取試樣勻漿2g（精確至0.01g)，以80mL水洗入100mL容量瓶中，超聲提取30min，每5min振搖一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min，取出放置至室溫，加水稀釋至刻度。溶液經(jīng)濾紙過濾后，取部分溶液于10000轉(zhuǎn)／分鐘離心15min，上清液備用。
(3）乳：稱取試樣10g（精確至0.01g)，置于100mL容量瓶中，加水80mL,搖勻，超聲30min，加入3％乙酸溶液2mL，于4℃放置20min，取出放置至室溫，加水稀釋至刻度。溶液經(jīng)濾紙過濾，取上清液備用。
(4）乳粉：稱取試樣2.5g（精確至0.01g)，置于100mL容量瓶中，加水80mL，搖勻，超聲30min，加入3％乙酸溶液2mL，于4℃放置20min，取出放置至室溫，加水稀釋至刻度。溶液經(jīng)濾紙過濾，取上清液備用。
(5）取上述備用的上清液約15mL，通過0.22μm水性濾膜針頭濾器、C18柱，棄去前面3mL(如果氯離子大于100mg/L，則需要依次通過針頭濾器、C18柱、Ag柱和Na柱，棄去前面7mL)，收集后面洗脫液待測。固相萃取柱使用前需進行活化，如使用OnGuardⅡRP柱（1.0mL)、OnGuard11Ag柱（1.0mL）和OnGuardⅡNa柱（1.0mL)[給出這一信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用者，并不表示對該產(chǎn)品的認(rèn)可，如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使用這些等效的產(chǎn)品。]，其活化過程為：OnGuardⅡRP柱（1.0mL）使用前依次用10mL甲醇、15mL水通過，靜置活化30min.OnGuardⅡAg柱（1.0mL）和OnGuardⅡNa柱（1.0mL)用10mL水通過，靜置活化30min。
4.3參考色譜條件
(1)色譜柱：氫氧化物選擇性，可兼容梯度洗脫的高容量陰離子交換柱，如DionexlonPacASll一HC4mm×250mm（帶lonPacAGll一HC型保護柱4mm×50mm)〔給出這一信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用者，并不表示對該產(chǎn)品的認(rèn)可，如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使用這些等效的產(chǎn)品。］，或性能相當(dāng)?shù)碾x子色譜柱。
(2）淋洗液：
①一般試樣：氫氧化鉀溶液，濃度為6一70mmol/L;洗脫梯度為6mmol/L30min,70mmol/L5min,6mmol/L5min；流速1.0mL/min。
②粉狀嬰幼兒配方食品：氫氧化鉀溶液，濃度為5一50mmol/L;洗脫梯度為5mmol/L33min,50mmol/L5min,5mmol/L5min；流速1.3mL/min。
(3）抑制器：連續(xù)自動再生膜陰離子抑制器或等效抑制裝置。
(4）檢測器：電導(dǎo)檢測器，檢測池溫度為35℃。
(5)進樣體積：50μL(可根據(jù)試樣中被測離子含量進行調(diào)整）。
4.4測定
4.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線
移取亞硝酸鹽和硝酸鹽混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，加水稀釋，制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，含亞硝酸根離子濃度為0.00mg/L、0.02mg/L、0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L；硝酸根離子濃度為0.0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，從低到高濃度依次進樣。得到上述各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。以亞硝酸根離子或硝酸根離子的濃度（mg/L)為橫坐標(biāo)，以峰高（μS)或峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計算線性回歸方程。
4.4.2樣品測定
分別吸取空白和試樣溶液50μL，在相同工作條件下，依次注入離子色譜儀中，記錄色譜圖。根據(jù)保留時間定性，分別測量空白和樣品的峰高（μS)或峰面積。
分析結(jié)果的表述
試樣中亞硝酸鹽（以NO-2計）或硝酸鹽（以NO-3計）含量按式（1一1)計算：
X＝[(c-c0)×V×f×1000]/m×1000．．．．．．．．．．．．．．．(1一1)
式中：X—試樣中亞硝酸根離子或硝酸根離子的含量，mg/kg;
c—測定用試樣溶液中的亞硝酸根離子或硝酸根離子濃度，mg/L;
c0—試劑空白液中亞硝酸根離子或硝酸根離子的濃度，mg/L;
V—試樣溶液體積，mL;
f—試樣溶液稀釋倍數(shù)；
m—試樣取樣量，g。
說明：試樣中測得的亞硝酸根離子含量乘以換算系數(shù)1.5，即得亞硝酸鹽（按亞硝酸鈉計）含量；試樣中測得的硝酸根離子含量乘以換算系數(shù)1.37，即得硝酸鹽（按硝酸鈉計）含量。
以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
六、精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對值差不得超過算術(shù)平均值的10%。
