苯并[a] 芘(Bap) 是一種公認的強致癌物質(zhì)，主要由煤炭、石油、天然氣、木材等不完全燃燒而產(chǎn)生，在土壤、空氣、水等多種環(huán)境介質(zhì)中廣泛存在。水體中苯并[a] 芘的主要來源包括工業(yè)“三廢”排放、降水和儲水槽及管道涂層淋溶等。人體和動物攝入該物質(zhì)后，可誘發(fā)皮膚、肺和消化道癌癥，對健康造成很大威脅［1–2］。我國國標GB 5749–2006［3］規(guī)定生活飲用水中苯并[a] 芘限值為0.000 01 mg／L。
目前苯并[a] 芘的檢測方法主要有乙?；癁V紙層析熒光分光光度法、薄層色譜法、高效液相色譜熒光檢測器法、氣相色譜法、氣相色譜– 質(zhì)譜聯(lián)用等方法［4–13］。國標GB／T 5750–2006［9］推薦使用高效液相色譜熒光檢測器測定苯并[a] 芘，其前處理方法低效繁瑣，液相色譜檢測器要求為熒光檢測器，這使生活飲用水中苯并[a] 芘的檢測在實際操作和儀器配置方面有一定的局限性。筆者研究了高效液相色譜二極管陣列檢測器檢測生活飲用水中苯并[a] 芘的方法，對樣品前處理方法和色譜分析條件進行了優(yōu)化，該方法具有準確、快速、簡便的優(yōu)點，拓展了液相色譜檢測器的選擇范圍，滿足GB 5749–2006［3］對苯并[a] 芘的檢測需求。
1實驗部分
1.1主要儀器與試劑
高效液相色譜儀：LC–20AT 型，配備二元泵、脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、LC–Solution 色譜工作站、二極管陣列檢測器(PDA)，日本島津公司；
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：RE52CS 型，上海亞榮生化儀器廠；
溶劑過濾器：T–50.1L 型，天津市津騰實驗設(shè)備有限公司；
超純水機：FDY1002–UV 型，青島富勒姆科技有限公司；
甲醇、環(huán)己烷：HPLC 級，美國DIKMA 公司；
無水硫酸鈉：優(yōu)級純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；
苯并[a] 芘標準溶液：20 mg／L，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；
實驗用水為超純水。
1.2水樣處理
參考文獻［9–10］確定水樣的前處理方法。取500 mL 均勻水樣置于1 000 mL 分液漏斗中，用70mL 正己烷分兩次萃取(40 mL 和30 mL)，每次振搖5 min，注意放氣。靜置分層后，棄去水相。合并兩次的正己烷萃取液。用真空泵抽濾使正己烷萃取液通過覆蓋無水硫酸鈉的0.45 μm 有機濾膜，于60～70℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，冷卻后，將殘留物溶于甲醇中，定容至1.0 mL，搖勻后過0.45μm 有機濾膜，待測。
1.3色譜條件
色譜柱：C18 反相色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm，日本島津公司) ；流動相：甲醇– 水( 體積比為90∶10) ；流量：1.0 mL／min ；檢測波長：295nm ；柱溫：35℃；進樣體積：20 μL。
1.4標準曲線的繪制
準確吸取苯并[a] 芘標準溶液(20 mg／L) 0.5mL 于50 mL 容量瓶中，用甲醇定容，將其作為標準儲備溶液(0.2 mg／L)。分別準確吸取不同體積的苯并[a] 芘標準儲備溶液，用甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為0，4，7，15，26，50，70，100 ng／mL 的苯并[a]芘標準使用溶液。采用1.3 色譜條件進樣分析，以苯并[a] 芘標準使用溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。
2結(jié)果與討論
2.1色譜條件的優(yōu)化
2.1.1流動相與流量
比較了3 種流動相配比，在甲醇– 水體積比為為90∶10，85∶15，80∶20 條件下，發(fā)現(xiàn)在甲醇– 水體積比為90∶10 時苯并[a] 芘和樣品中干擾物能達到較好的基線分離( 見圖1) ；在0.5～2.0 mL／min范圍內(nèi)調(diào)整流量，發(fā)現(xiàn)流量為1.0 mL／min 時苯并[a] 芘出峰時間合適，峰形較好( 見圖2)。
2.1.2檢測波長
在230，254，270，287，295，296 nm 波長條件下檢測苯并[a] 芘，發(fā)現(xiàn)波長為295 nm 時苯并[a] 芘響應(yīng)值大，且雜質(zhì)干擾小。因此實驗選擇檢測波長為295 nm。
2.1.3進樣體積
通過不同體積進樣量比較，發(fā)現(xiàn)進樣體積為20 μL 時，檢測器對標準曲線最低濃度標準樣品(4ng／mL) 苯并[a] 芘有響應(yīng)，且峰形較好。
綜合以上試驗結(jié)果，確定高效液相色譜二極管陣列檢測器檢測苯并[a] 芘的最佳色譜條件見1.3，在此條件下苯并[a] 芘標準樣品(70 ng／mL) 的色譜圖見圖2。
2.2標準曲線與檢出限
GB 5749–2006［3］規(guī)定生活飲用水中苯并[a] 芘限值為0.000 01 mg／L，若取500 mL 水樣檢測，經(jīng)萃取濃縮后定容至1.0 mL，濃縮倍數(shù)500 倍。為滿足檢測判定要求，按1.4 繪制標準曲線。苯并[a] 芘質(zhì)量濃度x 在0～100 ng／mL 范圍內(nèi)，其線性回歸方程為f(x)=193.93x+15.56，相關(guān)系數(shù)r=0.999 97。
將濃度已知的樣品測試的信號和空白樣品的信號作對比，在信噪比為3∶1 的條件下得出本方法的檢出限是6 ng／L。若取500 mL 水樣測定，本法最低檢測質(zhì)量為0.08 ng，定量下限為8 ng／L。因此該方法靈敏度高，滿足分析要求。
2.3精密度試驗
在1.3 色譜條件下，將質(zhì)量濃度為50 ng／mL的標準樣品重復(fù)測定9 次，記錄標準樣品苯并[a]芘的峰面積，計算得苯并[a] 芘峰面積的相對標準偏差為1.06%（結(jié)果見表1），表明本方法的精密度良好。
2.4回收試驗
取生活飲用水水樣6 份，測定水樣中苯并[a]芘的含量并進行加標回收試驗，結(jié)果見表2。
由表2 可知，生活飲用水水樣中未檢出苯并[a]芘，水樣的加標回收率為88.1%～93.4%，說明該方法具有較高的準確度，滿足分析檢測要求，適合檢測生活飲用水中苯并[a] 芘。
3結(jié)語
建立了高效液相色譜二極管陣列檢測器檢測生活飲用水中苯并[a] 芘的測定方法，優(yōu)化了樣品前處理方法和檢測條件，拓展了生活飲用水苯并[a] 芘的檢測方法。與我國新版國標方法(GB／T5750–2006)［9］推薦使用的高效液相色譜熒光檢測器法比較，該法樣品預(yù)處理簡單，分離度高，分析時間短，適用于生活飲用水、地下水和地表水等較清潔水樣中苯并[a] 芘的準確定性定量測定。
參 考 文 獻
［1］信維平. 苯并[a] 芘的致癌性及快速檢測研究［J］. 研究與試驗，2000，188(2): 16–17.
［2］Michaela M，Věra K，Dagmar A. Analysis of Benzo[a]pyrene metabolites Formed by Rat Hepatic Microsomes using High Pressure Liquid Chromatography ：Optimization of the Method［J］.Interdisc Toxicol，2009，2(4): 239–244.
［3］GB 5749–2006生活飲用水衛(wèi)生標準［S］.
［4］GB 11895–1989水質(zhì)苯并[a] 芘的測定乙酰化濾紙層析分光光度法［S］.
［5］王海嬌，王娜，汪寅夫，等. 高效液相色譜法分析地下水和飲用水中苯并[a] 芘［J］. 巖礦測試，2010，29(5): 625–627.
［6］陳兆文. 飲用水中苯并[a] 芘的毛細管氣相色譜分析［J］. 環(huán)境化學(xué)，1995，14(2): 151–155.
［7］鄭海濤，劉菲，劉永剛. 固相萃取– 氣相色譜法測定水中多環(huán)芳烴［J］. 巖礦測試，2004，23(2): 148–152.
［8］陳慧，黃要紅，蔡鐵云. 固相萃取– 氣相色譜／質(zhì)譜法測定水中多環(huán)芳烴［J］. 環(huán)境污染與防治，2004，26(1) ：72–74.
［9］GB／T 5750–2006生活飲用水標準檢驗方法［S］.
［10］王浩，劉艷琴，楊紅梅，等. 高效液相色譜法測定糧食中苯并芘殘留的研究［J］. 糧油食品科技，2007，15(1) ：53–54.
［11］GB／T 15439–1995環(huán)境空氣苯并[a] 芘測定高效液相色譜法［S］.
［12］李春玉，石利利，單正軍，等. 土壤中苯并[a] 芘和二苯并［a，h］蒽的快速測定及其降解特性研究［J］. 環(huán)境污染與防治，2008(9): 43–44.
［13］程春梅，董劉敏，彭進. 超高效液相色譜法檢測食用油中的苯并(a) 芘［J］. 中國油脂，2011，36(2): 77–78.
【免責聲明】中國標準物質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)載作品注明出處，是出于傳遞更多信息之目的（非營利性），并不意味著贊同其觀點或證實其內(nèi)容的真實性。如轉(zhuǎn)載作品侵犯作者署名權(quán)，或有其他諸如版權(quán)、知識產(chǎn)權(quán)等方面的傷害，并非本網(wǎng)故意為之，在接到相關(guān)權(quán)利人通知后將立即加以更正或刪除。
