一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
1．掌握鄰二氮菲光度法測(cè)定鐵的原理及方法。
2.熟悉繪制吸收曲線的方法，正確選擇測(cè)定波長(zhǎng)。
3．學(xué)會(huì)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法。
4．通過(guò)鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵，掌握721型（或722型）分光光度計(jì)的正確使用方法，并了解該儀器的主要構(gòu)造。
二、實(shí)驗(yàn)原理
鄰二氮菲與Fe2＋在pH為2.0-9.0溶液中形成橙紅色配合物。本實(shí)驗(yàn)用HAc-NaAc緩沖溶液，pH為5.0-6.0。
配合物的配合比為3：1.。Fe3＋與鄰二氮菲作用形成藍(lán)色配合物，穩(wěn)定性較差，因此在實(shí)際工作中常加入還原劑鹽酸經(jīng)胺，使Fe3＋還原為Fe2+，與顯色劑鄰二氮菲作用，以測(cè)定樣品中Fe3＋和Fe2十之總量。
三、儀器和試劑
儀器：721型或722型分光光度計(jì)，容量瓶（50mL)8支，移液管（10mL)1支，吸量管（5mL)4支。
試劑：
(1）鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg·mL-1。準(zhǔn)確稱取0.8634g鐵鹽NH4Fe(SO4)2·12H2O置于燒杯中，加入20mL6mol·L-'HCl和少量水，溶解后，定量轉(zhuǎn)移入1L容量瓶中，加水稀釋至刻度，充分搖勻。
(2)鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg·mL-1。用移液管移取上述鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液10.00mL,置于100mL容量瓶中，加6mol·L-1HCl2.0mL，然后加水稀釋至刻度，充分搖勻。
(3)10%鹽酸經(jīng)胺溶液（新配制）。
（4）0.1%鄰二氮菲溶液（新配制）。
(5)HAc-NaAc緩沖溶液（PH}-5.0)：稱取136gNaAc，加水使之溶解，在其中加入120mL冰醋酸，加水稀釋至500mL,
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟
1.溶液的配制用吸量管吸取鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（10μg·L-1)0.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL及試樣溶液×.××mL分別放入7個(gè)50mL容量瓶中，加入1.00mL10%鹽酸經(jīng)胺溶液、5.00mLHAc-NaAc緩沖溶液和2.00mL0.1％鄰二氮菲溶液，加蒸餾水稀釋至刻度，充分搖勻。放置5min,
2.鄰二氮菲一Fe2+吸收曲線的繪制用3cm比色皿，以試劑溶液為參比液(0號(hào)溶液，即在0.00mL鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液中，加入相同試劑），利用721型分光光度計(jì)，在440-560nn波長(zhǎng)范圍內(nèi)分別測(cè)定5號(hào)溶液的吸光度值。在臨近最大吸收波長(zhǎng)附近應(yīng)間隔波長(zhǎng)5-10nm測(cè)其A值，其他各處可間隔波長(zhǎng)20~40nm測(cè)其A值。然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，所測(cè)A值為縱坐標(biāo)，繪制出吸收曲線，并找出最大吸收峰的波長(zhǎng)，以λmax表示。
3．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用3cm比色皿，以0號(hào)溶液為參比液，選擇λmax為測(cè)定波長(zhǎng)，測(cè)1-5號(hào)溶液的A值。以鐵的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4．試樣分析
(1)水樣分析取1支50mL容量瓶，加入5.00mL（或10mL，鐵含量以在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)為合適）未知試樣溶液，按實(shí)驗(yàn)步驟1的方法顯色后，在Am.二處，用3cm比色皿，以試劑為參比液，平行測(cè)定A值。求其平均值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出鐵的質(zhì)量濃度，計(jì)算試樣中鐵的濃度。
(2)石灰石中微量鐵的測(cè)定準(zhǔn)確稱取試樣0.4-0.5g（如鐵含量較高，則適當(dāng)減少稱樣量）于小燒杯中，滴加少量水使之潤(rùn)濕，蓋上表面皿，滴加3mol·L-1HCl溶液至試樣溶解，將溶液定量轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，用少量水淋洗表面皿及燒杯，一并轉(zhuǎn)入容量瓶中。然后依次加入1mL鹽酸輕胺（10%)溶液、2mL 0.10。
鄰二氮菲、5mLHAc-NaAc緩沖溶液，加水稀釋至刻度，搖勻，放置5min。按實(shí)驗(yàn)步驟3，測(cè)定A值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出鐵的質(zhì)量濃度，計(jì)算試樣中鐵的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
附722型分光光度計(jì)的使用方法
(1)將靈敏度旋鈕調(diào)置“I”檔（放大倍率最?。?。
(2)開啟電源，指示燈亮，儀器預(yù)熱20min，選擇開關(guān)置“T"。
(3)打開樣品室蓋（光門自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié)“0%T”旋鈕，使數(shù)字顯示“0.00"。
(4)將裝有溶液的比色皿放置比色皿架中。
(5)旋動(dòng)儀器波長(zhǎng)手輪，把測(cè)試所需的波長(zhǎng)調(diào)節(jié)至刻度線處。
(6)蓋上樣品室蓋，將參比溶液比色皿置于光路，調(diào)節(jié)透過(guò)率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0"。如果顯示不到100%，則可適當(dāng)增加靈敏度的檔數(shù)，同時(shí)應(yīng)重復(fù)“3”調(diào)整儀器的“0.00"
(7)將被測(cè)溶液置于光路中，讀出被測(cè)溶液的透光率（T）值。
(8）吸光度A的測(cè)量，參照“3”和“6”調(diào)整儀器的“0.00”和“100.0"，將選擇開關(guān)置于A，旋動(dòng)吸光度調(diào)零旋鈕，使數(shù)字顯示為“0.00"，然后移入被測(cè)溶液，顯示值即為試樣的吸光度A值。
(9)濃度的測(cè)量，選擇開關(guān)由A旋到。，將已標(biāo)定濃度的溶液移入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測(cè)溶液移入光路，即可讀出相應(yīng)濃度值。
(10）本儀器數(shù)字顯示后背部，裝有接線柱，可輸出模擬信號(hào)。
(11）如果大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)時(shí)，需等數(shù)分鐘才能正常工作（因長(zhǎng)波向短波或短波向長(zhǎng)波移動(dòng)時(shí)，光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間）。
