維生素B1因其分子中含有硫和胺,又稱硫胺素。因其發(fā)現(xiàn)還與預(yù)防和治療腳氣病有關(guān),故又稱為抗腳氣病維生素、抗神經(jīng)炎維生素。它是維生素中最早發(fā)現(xiàn)的一種,由1個(gè)嘧啶環(huán)和1個(gè)噻唑環(huán)通過(guò)亞甲基連接形成。維生素B1為白色結(jié)晶,易溶于水,在干燥和酸性溶液中穩(wěn)定,在堿性環(huán)境,尤其在長(zhǎng)時(shí)間煮燒時(shí)維生素B1則迅速分解破壞。還原性物質(zhì)亞硫酸鹽、二氧化硫等能使維生素B1失活,當(dāng)使用亞硫酸鹽作防腐劑或用二氧化硫熏蒸谷倉(cāng)時(shí),維生素B1被分解破壞。
食物中維生素B1定量分析,可利用游離型維生素B1與多種重氮鹽偶合呈各種不同顏色,進(jìn)行分光光度測(cè)定;也有將游離型維生素B1氧化成硫色素,測(cè)定其熒光強(qiáng)度;還有利用帶熒光檢測(cè)器的高效液相色譜法測(cè)定。分光光度法適用于測(cè)定維生素B1含量較高的食物,如大米、大豆、酵母、強(qiáng)化食品等;熒光法和高效液相色譜法適用于微量測(cè)定。這里主要介紹熒光法。
樣品經(jīng)熱稀酸處理,以提取維生素B1。如果所含維生素B1為游離態(tài),可直接在堿性鐵氰化鉀溶液中被氧化成噻嘧色素(硫色素),在紫外線照射下,噻嘧色素發(fā)出熒光。在給定的條件下,以及沒(méi)有其他熒光物質(zhì)干擾時(shí),此熒光之強(qiáng)度與噻嘧色素量成正比,即與溶液中維生素B1量成正比。
如試樣中含雜質(zhì)過(guò)多,應(yīng)經(jīng)過(guò)離子交換劑處理,使維生素B1與雜質(zhì)分離,然后以所得溶液作測(cè)定。
樣品中維生素B1含量根據(jù)下列公式計(jì)算:
X=(U-Ub)×[(ρ×V)/(S-Sb)×(V1/V2)×(1/m)×(100/1000)]
式中;X—樣品中維生素B1含量,mg/l00g;
U一樣品熒光強(qiáng)度;
Ub—樣品空白熒光強(qiáng)度;
S—標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度;
Sb—標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度;
ρ—維生素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度,μg/mL;
V—用于凈化的維生素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液體積,mL;
V1—樣品水解后定容之體積,mL;
V2—樣品用于凈化的提取液體積,mL;
m—樣品的質(zhì)量,g;
100/1000一樣品含量由μg/g換算成mg/l00g的系數(shù)。
說(shuō)明及注意事項(xiàng)如下。
(1)一般食品中維生素B1有游離型的,也有結(jié)合型,即與淀粉、蛋白質(zhì)等結(jié)合在一起的,故需用酸和酶水解,使結(jié)合型B1成為游離型,再采用此法測(cè)定。
(2)硫色素能溶解于正丁醇,在正丁醇中比在水中穩(wěn)定,故用正丁醇等提取硫色素。萃取時(shí)振搖不宜過(guò)猛,以免乳化,不易分層。
(3)紫外線破壞硫色素,所以硫色素形成后要迅速測(cè)定,并力求避光操作。
(4)用甘油一淀粉潤(rùn)滑劑代替凡士林涂鹽基交換管下活塞,因凡士林具有熒光。
(5)谷類物質(zhì)不需酶分解,樣品粉碎后用25%酸性氯化鉀直接提取,氧化測(cè)定。