維生素D為一組存在于動(dòng)植物組織中的類固醇的衍生物，因其有抗佝僂病作用，也稱之為抗佝僂病維生素。目前己知的維生素D至少有10種，但最重要的是維生素D2和維生素D3。維生素D2又名麥角鈣化醇，分子式為C28H44O，相對(duì)分子質(zhì)量為396.66；維生素D3又名膽鈣化醇，分子式為C27H44O，相對(duì)分子質(zhì)量為384.65。
食品中維生素D的含量很少，且主要存在于動(dòng)物性食品中。維生素D的含量一般用國際單位（IU）表示，1國際單位的維生素D相當(dāng)于0.025μg的維生素D。幾種富含維生素D的食品中維生素D的含量（IU/100g）如下：奶油50，蛋黃150一400，魚40一150，肝10一70，魚肝油800一30000。
維生素D的測(cè)定方法有比色法、紫外分光光度法、氣相色譜法、液相色譜法及薄層層析法等。其中比色法靈敏度較高，但操作十分復(fù)雜、費(fèi)時(shí)。氣相色譜法雖然操作簡(jiǎn)單，精密度也高，但靈敏度低，不能用于含微量維生素D的樣品。液相色譜法的靈敏度比比色法高20倍以上，且操作簡(jiǎn)便，精度高，分析速度快，是目前分析維生素D的最好方法。這里主要介紹三氯化銻比色法。
在三氯甲烷溶液中，維生素D與三氯化銻結(jié)合生成一種橙黃色化合物，呈色強(qiáng)度與維生素D的含量成正比。
皂化與提取同維生素A的測(cè)定。如果樣品中有維生素A共存，可用以下方法進(jìn)行分離純化。
(1)分離柱的制備：取一支具有活塞和砂蕊板的玻璃層析柱。
第一層：加入無水硫酸鈉，鋪平整。
第二層：將celite540置于碘值瓶中，加入石油醚，振搖，再加入聚乙二醇600，劇烈振搖，使其黏合均勻，然后倒入層析柱內(nèi)。
第三層：加中性氧化鋁。
第四層：加入無水硫酸鈉。
輕輕地轉(zhuǎn)動(dòng)層析柱，使第二層的高度保持在12cm左右。
(2）純化：先用石油醚淋洗分離柱，然后將樣品提取液倒入柱內(nèi)，再用石油醚繼續(xù)淋洗。棄去最初收集的濾液，再用容量瓶收集淋洗液至刻度。將淋洗液移入分液漏斗中，加水洗滌3次（去除殘留的聚乙二醇，以免與三氯化銻作用形成混濁物，影響比色）。將上述石油醚層通過無水硫酸鈉脫水后，置于濃縮器中減壓濃縮至干或在水浴上用水泵減壓抽干，立即加入三氯甲烷溶解備用。
根據(jù)樣品溶液的吸收值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的含量，然后樣品中維生素D含量根據(jù)下列公式計(jì)算：
X=(ρ×V)/(m×1000)×100
式中;X—樣品中維生素D的含量，mg/100g;
ρ—標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品溶液中維生素D的含量，μg/mL如按國際單位，每國際單位=0.025μg維生素D);
V一樣品提取后用三氯甲烷定容之體積，mL;
m—樣品的質(zhì)量，g。
說明及注意事項(xiàng)如下。
(1)食品中維生素D的含量一般很低，而維生素A、維生素E、甾醇等成分的含量往往都大大超過維生素D，嚴(yán)重干擾維生素D的測(cè)定，因此測(cè)定前必須經(jīng)柱層析除去這些干擾成分。
(2)操作時(shí)加入乙酰氯可以消除溫度的影響，使靈敏度比僅用三氯化銻提高約3倍，并可減少部分甾醇的干擾。
(3）此法不能區(qū)分維生素D2和維生素D3，測(cè)定值是兩者的總量。
