維生素A是不飽和的一元多烯醇。在自然界有維生素A1和維生素A2兩種。A1存在于哺乳動物及咸水魚的肝臟中,即視黃醇。A2存在于淡水魚的肝臟中,是3一脫氫視黃醇,其活性大約只有A1的一半。視黃醇的分子式為C20H30O,相對分子質(zhì)量為286。
維生素A1還有許多種衍生物,包括視黃醛(維生素A1末端的一CH2OH氧化成一CHO)、視黃酸(-CHO進一步被氧化成COOH),3一脫氫視黃醛,3一脫氫視黃酸及其各類異構體,它們也都具有維生素A的作用,總稱為類視黃素。
維生素A的測定方法有三氯化銻比色法、紫外分光光度法、熒光法、氣相色譜法和高效液相色譜法等,其中比色法應用最為廣泛,這里主要介紹三氯化銻比色法。
維生素A在三氯甲烷中與三氯化銻相互作用,產(chǎn)生藍色物質(zhì),其深淺與溶液中所含維生素A的含量成正比。該藍色物質(zhì)雖不穩(wěn)定,但在一定時間內(nèi)可用分光光度計于620nm波長處測定其吸光度。
根據(jù)樣品性質(zhì),可采用皂化法或研磨法對樣品進行處理。
(1)皂化法適用于維生素A含量不高的樣品,可減少脂溶性物質(zhì)的干擾,但全部試驗過程費時,且易導致維生素A損失。
(2)研磨法適用于每克樣品維生素A含量大于5.0μg樣品的測定,如動物肝的檢測。步驟簡單,省時,結果準確。
樣品中維生素A含量根據(jù)下列公式計算:
X=(ρ/m)×V×(100/1000)
式中:X-樣品中維生素A的含量,μg/100g(或國際單位,每國際單位=0.3μg維生素A);
ρ—由標準曲線上查得樣品中含維生素A的含量,μg/mL;
m—樣品的質(zhì)量,g;
V一提取后加三氯甲烷定量之體積,mL;
100/1000一將樣品中維生素A由μg/g;折算成mg/100g。
說明及注意事項如下。
(1)三氯化銻比色法為國家標準方法,適用于食品中維生素A的測定。
(2)乙醚為溶劑的萃取體系,易發(fā)生乳化現(xiàn)象。在提取前,洗滌操作中,不要用力過猛,若發(fā)生乳化,可加幾滴乙醇消除乳化。
(3)所用氯仿中不應含有水分。原因是三氯化銻遇水會出現(xiàn)沉淀,干擾比色測定。故在每1mL氯仿中應加入乙酸配1滴,以保證脫水。
(4)由于三氯化銻與維生素A所產(chǎn)生的藍色物質(zhì)很不穩(wěn)定,通常6s以后便開始退色,因此要求反應在比色杯中進行,產(chǎn)生藍色后立即讀取吸光值。
(5)如果樣品中含β一胡蘿卜素(如奶粉、禽蛋等食品)干擾測定,可將濃縮蒸干的樣品用正己烷溶解,以氧化鋁為吸附劑,丙酮己烷混合液為洗脫劑進行柱層析。
(6)三氯化銻腐蝕性強,不能灑在皮膚上,且三氯化銻遇水生成白色沉淀,因此用過的儀器要先用稀鹽酸浸泡后再清洗。