【實驗器材】
(1)儀器電子天平、高壓蒸汽滅菌鍋、pH計、燒杯、磁力攪拌器、容量瓶、鹽水瓶、滅菌過濾器、移液器及配套槍頭等。
(2)材料濾紙、稱量紙、濾膜。
(3)試劑 NaOH、NaHCO3、羥乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)、新鮮制備的三蒸水等。
【操作方法與步驟】
(一)NaHCO3的配制
(1)準(zhǔn)確稱取所需NaHCO3(常用濃度為3．7％、5.6 %或7．4％)，用一定量新鮮制備的三蒸水溶解。
(2)用三蒸水定容至所需體積，用0．22μm微孔濾膜濾過除菌。
(3)分裝于安瓿瓶中，于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?
(二)0．5 mol／L HEPES配制
(1)準(zhǔn)確稱取HEPES 119．15 g，用一定量新鮮制備的三蒸水溶解。
(2)用三蒸水定容至500 mL，用1 mol／L NaOH調(diào)其pH至7．5，再用0．22μm微孔濾膜濾過除菌。
(3)分裝小瓶，于常溫或4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?
(三)配制pH調(diào)整液注意事項
(1)NaHCO3每次用一支，并一次用完。
(2)使用NaHCO3要逐滴加入，并不時攪拌，防止局部pH過高。
(3)HEPES使用終濃度為10～50 mmol／L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含20 mmol/L HEPES即可達到緩沖能力。
(4)因為現(xiàn)在市售HEPES為約10 g包裝的小瓶，所以可根據(jù)實際情況靈活配制，但是要保證培養(yǎng)液內(nèi)HEPES的終濃度仍然為20 mmol／L。如稱取4．766 g HEPES溶于20 mL三蒸水中，過濾除菌后可完全(20 mL)加入1 L培養(yǎng)液中，或者每100 mL培養(yǎng)液中加入2 mL即可。
