1．儀器
HPLC儀(具紫外檢測器)。
2．試劑
①無水乙醇。
②10％酒石酸液。
③石油醚。
④NH4OH液。
⑤氯仿+異丙醇(3+1)。
⑥無水Na2SO4。
⑦乙氰。
⑧0．02mol·L-1KH2PO4。
⑨0．002mol·L-1K2HPO4。
⑩嗎啡、罌粟堿、可待因、那可丁標(biāo)準(zhǔn)貯存品(中國藥品生物制品檢定所)。
⑩嗎啡、罌粟堿、可待因、那可丁標(biāo)準(zhǔn)貯存液(100μg／mL)。
⑥嗎啡、罌粟堿、可待因、那可丁標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(10μg·mL-1)。
3．儀器工作條件
①紫外檢測器(波長254nm)。
②靈敏度0．02AUFS。
③色譜柱[C18柱(25cm×4．6mm)，粒徑10μm]。
④流動相：a．乙腈；b．0．02mol·L-1KH2PO4+0．002mol·L-1K2HPO4(梯度洗脫)。
4．檢測步驟
取500mL樣品于錐形瓶中，加熱煮沸至20mL，冷卻，加無水乙醇60mL，用10％酒石酸液調(diào)pH為4，低溫回流30min，趁熱過濾，用酸性乙醇洗瓶，過濾，合并于另一錐形瓶中，在水浴上揮去乙醇呈漿液狀，冷卻，加少許水溶解，過濾于分液漏斗中，用10％酒石酸液洗瓶，過濾，一并收入提取液于分液漏斗中，用石油醚30mL×2，分2次脫脂，棄醚層。水層于另一分液漏斗中用NH3·H2O液調(diào)pH為9，用氯仿+異丙醇(3+1)30mL×3，分3次提取，棄水層。有機(jī)層于分液漏斗中用無水Na2SO4脫水于K-D濃縮器中，濃縮近干，用N2吹干，加流動相1mL溶解，并定容至1mL，0．45μm膜過濾，待檢。取待檢液10μL，注入HLPC儀。
5．標(biāo)準(zhǔn)定位與樣品定性
若樣液中出現(xiàn)與4個標(biāo)準(zhǔn)品保留時間近似，則可確認(rèn)樣液中含有罌粟成分。
6．計(jì)算
樣液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)液峰面積比較定量，公式參照氣相色譜法。
7．說明
①本法采取梯度洗脫技術(shù)進(jìn)行分離，其分離效果較好。流動相梯度，如15％0．2min、
15％～50％a14min、50％o-60％a6min、60%a5min。
②用無水Na2SO4脫水應(yīng)徹底。
