引起食物中毒的是甲型鏈球菌，該菌產生溶血素等外毒素，人體攝人大量活菌可引起感染型食物中毒。主要癥狀為腹瀉、腹痛、惡心、嘔吐等急性胃腸炎。加熱至60℃、30～60min可殺死該細菌。人和動物的帶菌者常為污染的主要源。
1．常規(guī)培養(yǎng)法檢驗與鑒定
隨機取樣1～2g(mL)，接種于葡萄糖或血清肉湯增菌培養(yǎng)基內，37℃培養(yǎng)24～48h，如果樣品污染嚴重，可接種于匹克增菌培養(yǎng)基內，37℃培養(yǎng)24～48℃h。如有菌生長可進行涂片，革蘭氏染色和鏡檢，在視野中發(fā)現有革蘭氏陽性球菌，便可進行分離培養(yǎng)和細菌鑒定：取一接種環(huán)的菌液，劃線于2～4份血液瓊脂平板上，分別使用需氧和厭氧培養(yǎng)，于37℃下經18～24h后，鏈球菌形成的菌落細小、圓形、突起、灰白色、半透明、表面光滑，在菌落周圍發(fā)生約1mm寬，綠褐色的環(huán)便是a型溶血。如發(fā)生2～4mm寬、界限分明、無色透明的溶血圈，便是口型溶血。若菌落周圍不發(fā)生溶血圈，便是y型溶血或-1做不溶血。然后再涂片染色鏡檢，若為革蘭氏陽性球菌并呈鏈狀排列時，再轉接于血液瓊脂平板上進行純種分離。經分純后，若為溶血菌落，但其鏡檢形態(tài)不典型而呈雙球菌狀態(tài)時，應進行肉湯培養(yǎng)，菊糖發(fā)酵膽汁溶菌試驗，以便作肺炎鏈球菌的鑒別，還要進行生化反應和血清學鑒定。
2．生化反應試驗
生化反應可將幾種主要病原性鏈球菌加以區(qū)別、鑒定。
①a型溶血性鏈球菌與肺炎鏈球菌的生化鑒別
a．膽汁溶菌試驗：取已培養(yǎng)18～24h的待檢菌株液體培養(yǎng)液試管2支，每支約4mL，向其中一管加入1mL無菌膽汁，在37℃下60min后比較兩管的濃度，若為a型溶血鏈球菌，則應變?yōu)榛鞚?，若肺炎鏈球菌，則變?yōu)槌吻濉?/span>
b．菊糖發(fā)酵試驗：肺炎鏈球菌可以分解菊糖，而a型鏈球菌則為陰性。
②腸道鏈球菌與其他鏈球菌的生化鑒別
a．生長試驗：將待檢菌株接種于6．5％的氯化鈉葡萄糖肉湯、pH9．6葡萄糖肉湯、0．1％的美藍牛乳和40%膽汁葡萄糖肉湯培養(yǎng)基內，37℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，腸道鏈球菌均能生長。
b．耐熱試驗：將待檢菌株接種于0．5％的葡萄糖肉湯，在60℃水浴中經30min加熱處理后，再放入37℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，腸道鏈球菌仍有活力。
c．培育試驗：將待檢菌株接種于0．5％的葡萄糖肉湯2支，分別放于10℃和45℃下培養(yǎng)24h后觀察，腸道鏈球菌均應發(fā)育生長。
3．毒力試驗
口型溶血性鏈球菌的毒力試驗可用動物試驗和鏈激酶試驗。
①動物試驗：取分離純菌接種于葡萄糖肉湯中，于37℃培養(yǎng)24h，取出0．2mL接種于小白鼠腹腔內，如發(fā)病死亡即進行解剖取其心血接種于葡萄糖肉湯培養(yǎng)基內，37℃培養(yǎng)18～24小時后，觀察有無試驗菌生長。
②鏈激酶試驗：致病性溶血鏈球菌能產生鏈激酶(溶纖維蛋白酶)，此酶可激活正常人畜血液中的血漿蛋白酶原，使血漿蛋白酶溶解纖維蛋白。
取草酸鹽血漿0．2mL(草酸鉀0．01g，加入血液5mL，混勻，經離心沉淀，除去血球而得)，用生理食鹽水稀釋，再加入18～24h的鏈球菌肉揚培養(yǎng)物0．5mL，0．25％氯化鈣溶液0．25mL，搖勻，放在37℃水浴中，每隔數分鐘觀察一次，注意血漿是否凝固(通常約10min即可凝固)。血漿凝固后，再注意觀察及記錄溶化的時間，一般說來，溶化的時間愈短，表示該菌產生的鏈激酶越多。溶化快的在20min內可將凝固的血漿完全溶化，如果20min后沒有變化則在水浴中持續(xù)2h再觀察。2h后將試管放于37℃保溫箱內繼續(xù)觀察，以24h記錄作為最后結果。如凝塊全部溶化為+，24h不能溶化凝塊者為－。
4．血清學鑒定
①分群鑒定：將分離出來的純菌株，用熱鹽酸法提取鏈球菌的C多糖體作為群抗原，與群抗血清作沉淀反應試驗，即為分群鑒定。
a．多糖體群抗原的制備：將分離出來的純菌株，接種于5％兔或羊血清肉湯管(約5mL)內，37℃培養(yǎng)6h，再接種于100mL0．2％的葡萄糖肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h后，離心沉淀，將沉淀物用生理鹽水洗兩次，然后懸浮于0．05mol·L-1鹽酸溶液內，放沸水浴中15min取出。離心沉淀，取其上清液，加入溴麝香草酚藍指示劑1滴，并用0．2mol·L-1氧氧化鈉溶液中和，使溶液由黃變?yōu)闇\綠色。若在中和時出現沉淀須離心除去沉淀物。該上清液即為C多糖體群抗原。
b．沉淀反應試驗：該試驗應在直徑為2～4mm小試管內進行。先將群抗血清注入小試管內，再沿管壁徐徐注入上述鹽酸提取物，必要時可將該抗原(提取物)用生理食鹽水稀釋為1：10，l：20，l：40，1：80，1：160等，稀釋后使用。兩液重疊后，12～15min觀察結果，若為陽性結果，則在兩液重疊面間出現明顯的色環(huán)，無此色環(huán)者為陰性。
②分型鑒定：用上述分離出來的菌株純培養(yǎng)物做抗原，與含有抗T物質的抗血清在玻片上進行凝集試驗和分型鑒定。
a．T抗原制備：將在血清肉湯培養(yǎng)基中的培養(yǎng)轉移到無鹽肉湯培養(yǎng)基內，在22℃下培養(yǎng)48h后離心沉淀，棄去上清液，即為菌體抗原。
b．凝集試驗：抗血清按1：10，1：100，1：200，1：400，1：800等稀釋，然后在潔凈的載玻片上，與上述制備的菌體抗原進行凝集試驗，同時以生理食鹽水作對照，若在混菌的血清中發(fā)生凝集現象即為陽性，對照者應為陰性。
