食品中合成色素利用聚酰胺在酸性條件下，與水溶性酸性染料能牢固的結(jié)合，而在堿性條件下又能將色素解吸，然后用薄層色譜法進行分離鑒別后，與標準比較定量，或用分光光度計測吸光度定量。
1．儀器
①研缽(玻璃或瓷)。
②G2、G3耐酸漏斗。
③抽濾瓶(500mL、1000mL)。
④白瓷蒸發(fā)皿(50mL、10ml。)。
⑤微量注射器(50μL、l0μL)。
⑥玻璃基板(3cm×15cm、8cm×15cm、16cm×20cm)
⑦層析缸(11cm×10cm×18cm)。
⑧粉粒收集器(自制)。
⑨涂敷器。
⑩電吹風。
⑩分光光度計。
2．試劑
⑴聚酰胺粉，80～100目，100℃活化1h。
⑵硅膠G。
⑶甲醇-甲酸溶液(6：4)。
⑷甲醇溶液(99．5％)。
⑸丙酮一氨溶液：40mL丙酮、5mL水及1mL濃氨水混合，用時現(xiàn)配。
⑹20％的檸檬酸溶液。
⑺硫酸溶液(10％)。
⑻10％的磷鎢酸或鎢酸鈉溶液。
⑼乙醇一氨溶液(9：1)。
⑽氫氧化鈉5%。
⑾石油醚(沸程90～120℃)。
⑿甲醇一醋酸溶液(1：1)。
⒀冰醋酸。
⒁海沙(過20目篩，經(jīng)酸堿處理和漂洗干凈，烘干備用)。
⒂淀粉酶溶液：取淀粉酶2g，溶于10mL水中，用濾紙過濾后得澄清溶液，貯存于冰箱中備用。
⒃可溶性淀粉。
⒄展開劑
a．正丁醇：無水乙醇：1％氨溶液(6：2：3)。
b．正丁醇：吡啶：1%氨水(6：3：4)。
c．異丁醇：無水乙醇：水(6：2：2)。
d．正丁醇：吡啶：5％氨水(6：6：4)。
e．2．5%檸檬酸鈉：濃氨水(4：3)。
f．甲醇：乙二胺：濃氨水(10：3：4)。
g．2．5％檸檬酸鈉：10％氨水(4：3)。
h．醋酸乙酯：吡啶：水：濃氨水(35：15：5：7)。
i．甲醇：濃氨水：乙醇：(5：l：10)。
⒅標準溶液(0．1mg·mL-1)：胭脂紅、檸檬黃、莧菜紅、靛藍、日落黃、亮藍、新紅、赤蘚紅等。準確稱取上述色素各0．1000g，用pH6的蒸餾水溶解，移人100mL容量瓶中，并稀釋刻度，混勻。臨用時精確吸取該溶液5mL(根據(jù)所測項目)，置于50mL容量瓶中，加pH6的蒸餾水稀釋至刻度，混勻。濃標準溶液需在暗處保存。
3．樣品處理
①非酒精飲料：準確吸取樣品50mL于100mL燒杯中，汽水需加熱驅(qū)除二氧化碳。
②配制酒：準確吸取樣品100mL于燒杯中，加碎瓷片或玻璃珠，然后加熱除酒精。
③水果糖：準確稱取粉碎混勻樣品10g，加水30mL溫熱溶解，若樣品液pH值較高，用20％檸檬酸溶液調(diào)至pH為4左右。
④含淀粉制品(如淀粉軟糖等)：準確稱取切碎混勻樣品10g，加水50mL。加熱溶解，用20％檸檬酸溶液調(diào)至pH5，于88～90℃，加淀粉酶溶液5mL，攪勻后保溫5～10min，溶液澄清后取出。
⑤含蛋奶制品(如奶糖、蛋糕、冰淇淋等)：準確稱取破碎混勻樣品10g，加海砂少許，用熱風吹干，加入石油醚30mL攪拌，放置片刻，傾出石油醚，如此重復(fù)處理三次，以除去脂肪，吹干后研細，全部轉(zhuǎn)入G3耐酸漏斗中，緩慢抽濾，用乙醇_氨水溶液提取色素至色素溶液全部提盡，立即用l：10硫酸調(diào)溶液至微酸性，再多加lmL，加10％磷鎢酸溶液1～2mL，置水浴上濃縮至約20mL，使蛋白質(zhì)沉淀，用G3耐酸漏斗慢慢抽濾，用少量水洗滌，收集洗濾液。
⑥蜜餞類(如山楂片等)：準確稱取研碎樣品1．5g～2g，加水30mL，加熱使之溶解。
⑦肉制品：將肉用不銹鋼剪刀剪成小顆粒，置于研缽中搗碎，混勻，準確稱取樣品lg左右，加3g海砂、20mL丙酮于研缽中一起研磨，以除脂肪和水，重復(fù)用丙酮處理三次，用滴管吸出或傾出每次的丙酮的抽提液。將殘留物研成細粉，去殘留溶劑，將粉末全部轉(zhuǎn)移到G。耐酸漏斗中，用甲醇或乙醇的氫氧化鈉溶液從肉蛋白質(zhì)中提取色素物質(zhì)，用玻璃棒攪動漏斗中內(nèi)容物，直至色素全部提取完為止。將色素溶液加熱至70℃，用10％硫酸調(diào)到pH為1，加10％磷鎢酸lmL，慢慢攪動，使蛋白質(zhì)凝聚沉淀．將此沉淀物移入G3耐酸漏斗中抽濾，用10mL70℃蒸餾水洗滌漏斗，吸集全部濾液。
4．吸附分離
稱取聚酰胺粉0．5～1g于小燒杯中，加少量水調(diào)成糊狀，水浴上加熱至70℃的處理后的樣品液中，充分攪拌，使色素完全被吸附，如聚酰胺粉不足可補加。將聚酰胺沉淀物全部移入G3耐酸漏斗中，抽濾，用20％檸檬酸酸化至pH為4的70℃水反復(fù)洗滌。每次約20mL，邊洗邊攪拌，若含天然色素，再用甲醇一甲酸溶液洗滌1～3次，每次約20mL，至洗液無色為止。用70℃水再多次洗滌至洗液與原水pH相同為止。洗滌過程中必須充分攪拌，再用乙醇一氨溶液，分次解吸全部色素，收集全部解吸液，用20％檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至pH為6。(若用分光光度法測定，則用pH為6的蒸餾水定容至50mL；若用薄層色譜測定則將原液置水浴上濃縮至約2mL后移人5mL容量瓶中，用50％乙醇洗滌容器，洗液并人容量瓶中并稀擇至刻度)
