在硫酸介質(zhì)中環(huán)己基氨基磺酸鈉與反應，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，與磺胺重氮化后再與鹽酸萘乙二胺偶合生成紅色染料，在550nm波長測其吸光度，與標準比較定量。
1．儀器
①分光光度計。
②漩渦混合器。
③離心機。
④透析紙。
2．試劑
①三氯甲烷。
②甲醇。
③透析劑：稱取0．5g二氯化汞和12．5g氯化鈉于燒杯中，以0．01mol·L-1HCl溶液定溶至100mL。
④10g·L-1亞硝酸鈉溶液。
⑤10％硫酸溶液。
⑥100g·L-1尿素溶液(臨用時新配或冰箱保存)。
⑦10％鹽酸溶液。
⑧10g·L-1磺胺溶液。
⑨1g·L-1鹽酸萘乙二胺溶液。
⑩環(huán)己基氨基磺酸鈉標準溶液：精確稱取0．1000g環(huán)己基氨基磺酸鈉，加水溶解，最后定溶至100mL，此溶液每毫升含環(huán)己基氨基磺酸鈉1：mg(臨用時將環(huán)己基氨基磺酸鈉標準溶液稀釋10倍，此液每毫升含環(huán)己基氨基磺酸鈉0．1mg)。
3．樣品處理
①液體樣品：搖勻后直接稱取。含二氧化碳的樣品先加熱除去，含酒精的樣品用40g／L的氫氧化鈉調(diào)至堿性，于沸水中加熱除去，制成試樣。稱取10g已制備好的試樣于透析紙中，加10mL透析劑，將透析紙口扎緊，放人盛有80mL水的200mL廣口瓶中，加蓋，透析20～24h得透析液。定量轉(zhuǎn)人1．0mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。
②固體樣品：涼果、蜜餞類樣品將其剪碎制成試樣，準確稱取2g已剪碎的試樣于研缽中，加少許層析硅膠研磨成干粉狀，經(jīng)漏斗倒入100mL容量瓶中，加水沖洗研缽，并將洗液一并轉(zhuǎn)移至容量瓶中加水至刻度，不時搖動，lh后過濾，即得試樣。準確吸取10．00mL經(jīng)處理后的試樣提取液于透析紙中，加l0mL透析劑，將透析紙口扎緊，放人盛有80mL水的200mL廣口瓶中，加蓋，透析20～24h得透析液。定量轉(zhuǎn)人100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。
4．標準曲線的繪制及樣品中甜蜜素的測定
分別準確吸取0．00，2．50，5．00，7．50，10．00，12．50，15．00mL甜蜜素標準液及10．00mL透析液于8個50mL具塞比色管中，于0～3℃冰水浴中，加1mL，(10g·L-1)亞硝酸鈉溶液，1mol(10％)的硫酸溶液，混勻，于冰水浴中不時搖動，放置1h，取出后加15mL水，振動1min，靜置后取上層液，分別準確加入5mL三氯甲烷于各比色管中，各加入15mL甲醇，1mL(10g·L-1)磺胺，置冰浴中15min，取出，待回到常溫后，各加入1mL(1g·L-1)鹽酸萘乙二胺溶液，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，在15～30℃下放置15～30min，用1cm比色皿，在波長為550nm處測吸光度。從標準曲線中即可查得甜蜜素的含量。
5．計算
X=m1/[m*(V1/V2)]
式中：x——樣品中甜蜜素的含量，g·kg-1、mg·g-1；
m1——從標準曲線上查得甜蜜素的含量，mg；
m——稱取樣品的質(zhì)量，g；
V1——測定時所用樣品的體積，mL；
V2——樣品的總體積，mL。
