Comparison The Effect of Allicin And Antibiotics
on the Enzymes in the Digestive Tract of the Broilers
[Abstrac]t: 135 one day-old shiyan chicken were randomly divided into three groups, with three replicates each group, and 15 birds each replicates. The first group was control group, which was fed with basic diet. The second group was antibiotic group, which was fed with basic diet added to 50mg/kg roxarsone and 750mg/kg 10% chlortetracycline. The third group was trial group, which was fed with basic diet added to 160 mg/kg allicin. The activities of amylase, lipase and total protein of small intestine as well as the average daily gain (ADG) and the feed/gain (F/G) were measured at 21 and 42 day-old respectively. The results showed that the allicin groop : the activities of amylase of trial group were increase by 122.87% and 68.07% contrasted to the control group, and the activities of lipase of trial group increased by 89.99% and 50.00%,and the activities of total protein of trial group increased by 10.29% and 1.702%,respectively.Contrasted to the control group ,the Antibiotics group increased by 42.96%,56.32% and -10.02%,24.10% and -38.97%,34.37%.It is suggested that allicin should enhance the activities of amylase and lipase, but the effect on the activities of total protein was slight.It is better than Antibiotics.
[Key words]: Chicken; Allicin; Amylase; Lipase; Protein.
1 前言
1.1研究目的和意義
大蒜素作為一種中草藥添加劑，因為其含有各種營養(yǎng)物質(zhì),微量元素和維生素,并且使用時不存在中毒問題,對于動物保健和提高生產(chǎn)性能有顯著的作用因而倍受人們的關(guān)注。大蒜素是對多年生宿根草本百合科植物大蒜（allium sativum）中主要成分的總稱,是大蒜的提取液或合成物,是一種廣譜抗菌藥,大蒜素的分子式為C6H10S3,具有強烈的刺激味和蒜所特有的辛辣味,對動物有明顯的誘食作用,在體內(nèi)有殺菌消炎,降血壓,降血脂,抑制血小板積聚,減少冠狀動脈硬化,抑制體內(nèi)N-亞硝胺合成,防癌,治癌,抗病毒等多種功能。大蒜素用于醫(yī)藥對呼吸道,消化道,腦膜炎,腸道疾病有效率達80%-95%。大蒜素還用于獸藥,農(nóng)藥,食品添加劑等,在畜禽、水產(chǎn)和一些特種養(yǎng)殖動物中作為殺菌劑,調(diào)解劑,解毒劑,調(diào)味劑,動物保健增產(chǎn)劑及產(chǎn)品改善劑等被廣泛的使用并且效果顯著。莫棣華、袁志柱等試驗結(jié)果表明在試驗雞添加大蒜素，可顯著提高土雞日增重，降低料重比，改善雞肉風味；賈衛(wèi)斌王文斌等在鯽魚餌料中添加大蒜素，可提高鯽魚的日增重和飼料報酬；任培桃在生長肥育豬飼料中添加5%大蒜素能增強豬的食欲，提高增重5%以上。
大量試驗證明了大蒜素有提高畜禽生產(chǎn)性能的作用，但到目前為止關(guān)于大蒜素的作用機理的研究報道卻很少，土雞具有，生長速度慢，飼料消化率不高等特點，抗生素對此有一定效果。試驗就是通過大蒜素對不同日齡土雞消化道酶活性影響的研究來初步探討大蒜素與抗生素作用效果的差異。
1.2當前國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
大蒜素是從大蒜的球形鱗莖中提取的揮發(fā)性油狀物，是大蒜中主要生物活性成分，有多種生物學功能、抗菌譜廣、抗腫瘤、降膽固醇、抗血小板聚集、護肝、預防心血管疾病和降血壓等生理學作用。在人和動物體內(nèi)無殘留、不易產(chǎn)生耐藥性、不造成環(huán)境污染且價格低廉等優(yōu)點，而備受國內(nèi)外研究者的關(guān)注。有部分文章簡述了大蒜素的形成、大蒜素的化學結(jié)構(gòu)及性質(zhì)、影響大蒜素活性的因素、大蒜素的作用特點、大蒜素的功能和大蒜素的開發(fā)利用，并提出了今后大蒜素的研究方向。
大蒜素具有較強的抗菌消炎作用，對多種球菌、桿菌、真菌、病毒等均有抑制或殺滅作用。大蒜素對多種致病菌如葡萄球菌、腦膜炎、肺炎雙球菌、鏈球菌及白喉、痢疾、大腸桿菌、傷寒、副傷寒、百日咳、結(jié)核桿菌和霍亂弧菌等都有明顯 的抑制或殺滅作用。可治療急性菌痢、百日咳、嬰兒腹瀉、大葉性肺炎、肺結(jié)核、傷口化膿、沙眼等。大蒜素抗菌的原理 是由于大蒜素分子中的氧原子與細菌生長繁殖所必需的半胱氨酸分子中的巰基相結(jié)合而抑制了細菌的生長和繁殖。
大蒜素對多種致病真菌包括白色念珠菌有抑制或殺滅作用。低濃度時主要抑制真菌生長，高濃度時可完全殺死真菌。臨床已用于治療隱球菌腦膜炎、肺部及消化道真菌感染、白色念珠菌毒血癥、白色念珠菌引起的小兒消化不良、真菌性角膜炎、新生兒鵝口瘡、頭癬等。大蒜素的抗真菌機制是通過對巰基的氧化使蛋白質(zhì)滅活；對含巰基的化合物如胱氨酸、谷胱氨酸發(fā)生競爭性抑制；非競爭性地抑制真菌內(nèi)某些酶的活性。
巨細胞病毒(CMV)感染是導致骨髓移植失敗和患者死亡的主要原因之一，至今缺乏有效的防止措施。臨床研究發(fā)現(xiàn)大 蒜素對骨髓移植者并發(fā)人巨細胞病毒感染有明顯的防治作用 。隱孢子蟲Crypt0sp0ridium)是一種新發(fā)現(xiàn)的病原體，可引起 嬰幼兒腹瀉，對隱孢子蟲所致腹瀉，目前尚無特效藥，國內(nèi)試 用大蒜素治療取得了較好療效。大蒜素能有效殺傷弓形蟲速 殖子，可抗弓形蟲感染、特別是抗弓形蟲病復發(fā)的作用較明顯 。大蒜素的二丙烯基二硫醇溶液對乙肝病毒表面抗原的破壞率達43．5%，證明大蒜素對乙肝病毒表面抗原有一定的破壞作用。大蒜素還具有抗原蟲滴蟲作用，經(jīng)臨床驗證對阿米巴痢疾、 滴蟲性陰道炎有很好的治療作用。
慢性胃?。捍笏馑鼐哂薪档臀竷?nèi)亞硝酸鹽含量和抑制 硝酸鹽還原菌的作用。用大蒜素治療萎縮性胃炎患者，服藥1 個月后胃液pH值降低，酸度增加，且降低胃液內(nèi)亞硝酸鹽含量。大蒜素用于治療慢性胃病，對胃區(qū)不適、飽脹、隱痛、返酸、噯氣、燒灼及食欲不振等癥狀者有明顯改善，提示大蒜素對慢性胃病有一定治療作用。
幽門螺桿菌(HP)相關(guān)性消化性潰瘍：研究證明，幽門螺桿菌感染是消化性潰瘍的主要原因。大蒜素對消化道細菌 的抗菌殺菌作用明顯。臨床應用大蒜素對HP相關(guān)性消化性潰 瘍進行治療，結(jié)果證實大蒜素對治療HP相關(guān)性胃、十二指腸潰瘍有效。
慢性結(jié)腸炎：慢性結(jié)腸炎所致慢性腹瀉是消化系統(tǒng)疾病常見的一種臨床表現(xiàn)。王德立等應用米雅BM制劑(主要含 酪酸菌)和大蒜素聯(lián)合治療慢性結(jié)腸炎患者52例，結(jié)果顯示大 蒜素對治療慢性結(jié)腸炎所致腹瀉有良好的療效。
保護肝臟作用：大蒜素對四氯化碳誘發(fā)大鼠肝損傷引起的血清岍和脂質(zhì)過氧化物丙二醛水平的升高有明顯的抑制作用，這種作用具有劑量效應關(guān)系。認為大蒜素對化學性肝損傷的保護作用機理是大蒜素可抑制脂質(zhì)過氧化物對膜結(jié)構(gòu)的損傷。大蒜素可劑量依賴性地阻抑小鼠肝組織內(nèi)GSH耗竭 及GST下降，增加肝細胞中谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶的活性，增加肝臟的結(jié)合解毒功能，從而對肝臟乃至整個機體起保護作用大蒜素可通過提高肝臟環(huán)腺苷酸的水平，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝 膜轉(zhuǎn)運及細胞增殖，并增加酶的活性，使血脂水解增加，生物合成降低，增加血脂成分的排泄，維持血清、肝、腎的脂蛋自及甘油三酯在正常范圍內(nèi)，從而防治脂肪肝。
1.2.1大蒜素的特點
大蒜的有效成分有大蒜辣素、大蒜新素及多種烯丙基硫醚化合物，總稱為大蒜素或大蒜精油。大蒜素的分子式
，化學名為三硫化二丙烯（二烯丙基三硫化物），分子量為178.33。純品大蒜素為無色油狀物，具有大蒜異味，比重1.112（20℃），折射率1.561，無旋光性，稍溶于水，溶于乙醇、苯、乙醚等有機溶劑，對熱和堿不穩(wěn)定，對酸較穩(wěn)定。對皮膚有刺激性，對許多革蘭氏陽性和陰性細菌及真菌具有很強的抑制作用。大蒜的營養(yǎng)物質(zhì)含量豐富，據(jù)測定鮮大蒜含蛋白質(zhì)4.4%、脂肪0.2%、碳水化合物23%、粗纖維0.7%，還含有鈣、磷等礦物質(zhì)和硫胺素、核黃素等維生素及大蒜油(康文彪，1991)。天然大蒜精油中含有丙基二硫化丙烯(約60%)、二硫化二丙烯(23%一39%)、三硫化二丙烯(13%一19%)、二硫化二丙烷(4%一5%)、及甲基二硫化丙烯等多種揮發(fā)性含硫化合物，總含硫量約35%一45%(黃梅麗，1990)。人工合成的大蒜油的主要成分為三硫化二丙烯(50%一80%)、二硫化二丙烯(20%一50%)、少量的單硫化二丙烯和四硫化二丙烯。這4種成分的總含量一般在92%以上，其余不到8%的為低沸點的丙酮與乙醇、丙基烯丙基硫醚、二丙基硫醚等雜質(zhì)。當前飼料工業(yè)上使用的大蒜素一般是指人工合成的大蒜油為原料而制成的預混料，即大蒜油吸附在一定的載體上形成的預混料，是白色粉未。
1.3 大蒜素的發(fā)展前景
1.3.1合成大蒜素成本低
大蒜素的使用劑量較低,一般50～100mg/kg就有較好的作用效果。大蒜素濃度在10mg/kg以下時對魚類病菌就具有較好的抑菌作用。大蒜素的價格也較為低廉,是一些進口促生長類添加劑價格的幾分之一到幾十分之一,適于大范圍應用。
1.3.2大蒜素抗生素的替代品
大蒜素的抗菌譜較廣。大蒜素中的有效成分二烯丙基三硫醚對多種葡萄球菌、巴氏桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌、愛德華氏菌等病原微生物都有較強的抑制和殺滅作用,能有效地防治多種常見的傳染病,促進動物健康生長。大蒜素可在牛、豬、肉雞、蛋雞、鴨,以及魚類和一些特種經(jīng)濟養(yǎng)殖動物中使用,在動物的各生長階段也可使用,有著較廣的應用范圍。
1.3.3 人類醫(yī)學應用
1.3.3.1對心腦血管及血液系統(tǒng)的影響
大蒜素對心血管的作用是通過降低血漿總膽固醇、降血壓、抑制血小板活性、降低紅細胞壓積、降低血液粘度等作用來實現(xiàn)的。李格等將大蒜素用于心肌缺血再灌注損傷的防治。毛建蘭等發(fā)現(xiàn)腦梗塞急性期外周血白細胞濾過指數(shù)明顯升高，經(jīng)大蒜素治療后，在癥狀改善的同時白細胞濾過指數(shù)明顯降低，全血流變學指標也有改善。研究表明大蒜素具有活血化瘀、散寒通絡之功效，應用大蒜素治療冠心病心絞痛、周圍血管病取得了良好的療效。利用大蒜素片可以降低機體血漿內(nèi)皮素(ET)的水平，這對預防和緩解冠脈痙攣、減小外周血管張力有重要意義。大蒜素片對血漿一氧化氮(N0)濃度有升高作用，這有利于防止冠脈痙攣，而使機體保持冠脈舒張狀態(tài)。同時大蒜素對體內(nèi)膽固醇值和纖維蛋白原量的增加具有抑制作用，可提高纖維蛋白溶解活性，表明大蒜素片能有效地減輕或消除冠心病心絞痛患者動脈粥樣硬化的發(fā)生和血栓的形成。賈海忠等觀察大蒜素對不穩(wěn)定型心絞痛高血壓的影響，發(fā)現(xiàn)大蒜素對收縮壓和舒張壓均有明顯降低作用，且降壓速度比葛根素快。大蒜素降壓的機制可能是通過鈣拮抗，擴張外周血管起作用，也可能通過協(xié)同降壓作用。
大蒜素抗心律失常的作用亦引起一些學者的關(guān)注。Martin 等報道大蒜素有減慢竇性心率、抑制心肌收縮、抗心律失常的作用。國內(nèi)有關(guān)專家指出，大蒜素通過延長心肌細胞的有效不應期、降低自律性，起到抗心律失常的作用，因而可用于以快速心率為基礎的心律失常，如早搏、心動過速等，可作為輔助法。
1.3.3.2對腫瘤的影響
有實驗證實大蒜素具有預防胃癌發(fā)生的作用，其對胃液分離出的硝酸鹽還原菌的生長，及其產(chǎn)生亞硝酸鹽的能力均有明顯的抑制作用，可降低人體胃液中亞硝酸鹽含量，從而降低患胃癌的風險。用大蒜素治療患者的免疫指標也表明，在接受治療后，多數(shù)患者巨噬細胞的吞噬率及淋巴細胞轉(zhuǎn)化率都明顯升高。cAMP是腫瘤細胞生長的陰性信號，任何途徑提高細胞內(nèi)cAMP水平均可抑制腫瘤組織的生長，促使其分化。大蒜素可提高腫瘤組織內(nèi)cAMP水平，可抑制腫瘤組織的過度生長增殖”。解云濤等在大蒜素抑制小鼠S180生長的研究中，從透射電鏡中觀察到腫瘤細胞膜和核膜皺縮斷裂，線粒體出現(xiàn)腫脹和空袍樣改變，表明大蒜素對腫瘤細胞有直接殺傷作用。張桂梅等[2]研究了大蒜素對巨噬細胞殺滅和抑制小鼠S180肉瘤細胞、艾氏腹水癌細胞及肝癌細胞活性的影響，研究表明，大蒜素單獨或與其它激活劑協(xié)同作用時，具有增強巨噬細胞的抗腫瘤活性作用，同時可增強某些瘤細胞對巨噬細胞介導的細胞毒作用的敏感性。孫麗研究結(jié)果顯示：大蒜素能誘導腫瘤細胞凋亡，其原因可能和端粒酶活性下降有關(guān)。端粒酶活性下降后，端?？s短，細胞有絲分裂受阻，導致細胞凋亡。有人用流式細胞法(FCM)分析癌細胞周期時，發(fā)現(xiàn)大蒜素可以阻滯腫瘤細胞從G1期進入S期，使G1期細胞堆積，進而抑制細胞的增殖。有實驗證明人腫瘤組織中存在表皮生長因子(EGF)，EGF存在于癌細胞的細胞質(zhì)中，在癌細胞核及無癌部分均未發(fā)現(xiàn)EGF，并提示癌組織中的EGF是由人肝癌細胞產(chǎn)生的。Moyer等證明大蒜素能顯著抑制人肝癌細胞表皮生長因子受體(EGFR)的表達，明顯降低EGF刺激人肝癌細胞造成的EGFR的上調(diào)，從而實現(xiàn)抑制癌細胞生長的作用。大蒜素還能抑制皮膚癌，結(jié)腸癌，食道癌，鼻咽癌，肝癌的增長。原因之一是因為大蒜能防止自由基的形成從而減小了損害DNA、細胞膜和細胞蛋白的機會。
1.3.3.3對糖代謝的影響
糖尿病是以血糖增高和尿糖為特點，進而導致多臟器損的綜合征。如何逆轉(zhuǎn)糖尿病的高血糖狀態(tài)一直是國內(nèi)外學者研究的焦點。胰島素在調(diào)節(jié)機體血糖水平時起著非常重要的作用。動物實驗表明，不同劑量的大蒜素均可降低血糖值，其降血糖的作用主要是通過升高血清胰島素水平來實現(xiàn)的。同時病理學證實，大蒜素主要是通過促進胰腺泡心細胞轉(zhuǎn)化、胰島細胞增殖，使胰島素分泌增加，而發(fā)揮降血糖作用。而且大蒜素在體內(nèi)同脂肪、糖、蛋白質(zhì)結(jié)合后生成脂質(zhì)蒜素、糖質(zhì)蒜素、復合蛋白質(zhì)，這些結(jié)合物發(fā)揮作用得到一種與維生素E相同的效果。維生素E除具有抗氧化作用外，還具有改善胰島素的效應，關(guān)鍵是維持胰島內(nèi)分泌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)的完整性，保證胰島素的合成與分泌。
1.3.3.4對生殖的影響
實驗證明大蒜素對大鼠、田鼠及人的精子具有抑滅作用。抑精作用的強弱與藥物濃度相關(guān)。被殺死的精子未發(fā)現(xiàn)有形態(tài)學上的變化，雄大鼠吸入此藥并不干擾正常精子的發(fā)生，且效果比棉酚好。同時，它在有效抑精濃度對陰道局部沒有刺激作用，也不抑制乳酸桿菌的生長、繁殖，既不會導致局部的不良反應，也不會干擾陰道正常菌群。另據(jù)報道大蒜素乙醇提取物能增強豚鼠離體子宮的收縮頻度和幅度，作用與垂體后葉素相似。
1.3.3.5對免疫系統(tǒng)的影響
有人在大蒜素對小鼠免疫功能影響的實驗中發(fā)現(xiàn)，服藥組的脾臟、胸腺_的重量均有增加，T淋巴細胞激活增加，脾臟抗體形成細胞數(shù)量增加，單核細胞分泌水平提高，溶菌酶釋放增加，因此大蒜素可提高細胞免疫、體液免疫和非特異性免疫功能。
1.3.3.6對其他方面的影響
大蒜素對鉛中毒小鼠的致死效應具有拮抗作用，能提高鉛中毒小鼠的存活率。對于慢性鉛中毒小鼠能降低其組織中的鉛含量，且大蒜素的排鉛作用是持續(xù)的，能有效地排出機體內(nèi)蓄積的鉛。此外，大蒜素還具有除頭皮屑、抗搔癢、防止神經(jīng)痛、治療汞中毒、抗輻射、抗氧化、保護生物膜、抗衰老、防治蚊蟲叮咬、抗感冒等醫(yī)療保健作用。
1.4 主要研究類容
家禽對飼料的消化可以分為物理，化學和微生物作用，其中通過消化酶進行的化學性的消化起了決定作用，但由于仔雞生長快速的特點，使其自身常處于高度生理緊張，高度應激狀態(tài)，容易受飼料，飼養(yǎng)管理和環(huán)境的影響而導致消化道微生物群平衡紊亂和消化酶的分泌量或活性的不足。本試驗通過添加160mg/kg大蒜素能不同程度地提高土雞消化道淀粉酶，脂肪酶和總蛋白酶的活力,尤其是對腸道淀粉酶活力的影響更為明顯。這可能是因為大蒜素的添加使仔雞腸絨毛增多，變長并且排列整齊，腸壁增厚，有增強胃液分泌和胃腸蠕動，刺激食欲，有利于消化酶的分泌，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而達到比抗生素更好促進土雞生長的作用。
2材料與方法
2.1試驗動物
健康的1日齡十堰本地土雞仔雞。
2.2試驗地點
實驗地點：十堰高山畜禽有限公司
2.3 實驗試劑
1.大蒜素(25%）：山東濟南大華畜牧發(fā)展有限公司生產(chǎn)
2.洛克沙胂(98.5%):浙江福原獸藥有限公司
3.金霉素(10%):內(nèi)蒙古金河獸藥廠
4.淀粉酶測試盒：上?？菩郎锛夹g(shù)研究所生產(chǎn)
5.脂肪酶測試盒：南京建成生物工程研究所生產(chǎn)
6.鎢酸鈉:廣東汕頭西攏化工廠生產(chǎn)
7.鉬酸鈉:SHANGHAI CHEMICAL REGENT CO .LTD.生產(chǎn)
8.磷酸:上海建成試劑廠生產(chǎn)
9.鹽酸:上海東懿化學試劑公司生產(chǎn)
10.硫酸鋰:中國醫(yī)藥(集團)化學試劑公司生產(chǎn)
11.溴水: 中國醫(yī)藥(集團)化學試劑公司生產(chǎn)
12.酪氨酸:中國醫(yī)藥(集團)化學試劑公司生產(chǎn)
13.酪蛋白:上警后天山化工廠生產(chǎn)
14.三氯乙酸:上海凌峰化學試劑有限公司
15.碳酸鈉:宜興市第二化學試劑廠生產(chǎn)
16.電子分析天平:上海精密科學儀器有限公司生產(chǎn)
17.快速混勻器:江蘇省金壇市金成國勝實驗儀器廠生產(chǎn)
18.高速電動勻漿器: 江蘇省金壇市金成國勝實驗儀器廠生產(chǎn)
19.高速冷凍離心機: 上海安亭科學儀器廠生產(chǎn)
20.超低溫冰柜:日本 三洋生產(chǎn)
21.恒溫水浴鍋:. 江蘇省金壇市金成國勝實驗儀器廠生產(chǎn)
22.754紫外可見光光度計: 上海精密科學儀器有限公司生產(chǎn)
23.石英自動雙重純水蒸餾器: 江蘇省金壇市金成國勝實驗儀器廠生產(chǎn)
2.4實驗方法
2.4.1實驗動物處理
135羽1日齡土雞隨機分成3組,每組3個重復,每個重復15羽雞。對照組1，飼喂基礎日糧；對照組2，飼喂基礎日糧+50mg/kg洛克沙胂+750mg/kg 10%的金霉素；試驗組，按每千克飼料中添加160毫克的大蒜素。飼喂6周?；A日糧的配方及成分見表1。
將135羽1土種仔雞按照分欄飼養(yǎng)于三間密閉式雞舍中，采用厚墊料平面飼養(yǎng)，自由飲水，自由采食，雞舍內(nèi)的溫度在1日齡的時候在34℃，以后每周逐漸降低1-2℃，飼養(yǎng)期間按常規(guī)程序進行新城疫，法式囊，傳支病的免疫接種以及雞舍內(nèi)外的消毒工作。
分別在20日齡，41日齡晚18：00停食。待空腹12小時后于次日早晨6：00，從每個重復組隨機取兩只雞（雌雄各一只），稱重后屠宰（采用心臟采血處死），取出小腸。前部從肌胃與十二指腸結(jié)合部位剪斷，后部至回腸頭部剪斷，用鑷子將其內(nèi)容物擠入封口袋中，于-50℃超低溫冰柜中儲存。以備試驗處理。
準確稱取十二指腸內(nèi)容物1g，按W/V=5，加4℃預冷雙蒸水，快速勻漿30S（保持低溫環(huán)境，防止酶失活），勻漿液在16000轉(zhuǎn)/分，0-4℃條件下離心15分鐘，并且離心兩次，將上清液，然后再等分于三個青霉素瓶中于-50℃超低溫冰柜中保存，待測。
表1 基礎日糧配方及營養(yǎng)水平
2.4.2酶活性測定
2.4.2.1 十二指腸內(nèi)容物中的淀粉酶活力的測定
測定前將底物緩沖液在37℃預溫5分鐘，然后按下表順序加入試劑。
表2 淀粉酶活力測定試劑加入順序
然后將空白管和測定管利用紫外可見光度計測定光密度。
2.4.2.2 十二指腸內(nèi)容物中的脂肪酶活力的測定
試驗步驟:
(1)將分光光度計于420nm處以Trise緩沖液調(diào)零。
(2)在待測試管中加入4ml底物緩沖液,編號并放入37℃預溫5分鐘
(3)往相應編號已裝有底物緩沖液的試管加入0.05ml腸內(nèi)容物勻漿上清液,迅速用冰箱保鮮薄膜蓋住管口,再用拇指摁住,立即顛倒混合5次(切勿用力振蕩)。
(4)迅速倒入比色皿中，在分光光度計于420nm處比色，讀取吸光度值（A1值）。
(5)將此比色液倒入原試管中置于37℃準確水浴中10分鐘,再按照上面相同的方法比色,讀取吸光度值(A2值)。
(6)求出兩次吸光度差值(△A=A1-A2)
2.4.2.3 十二指腸內(nèi)容物中總蛋白酶活力的測定
Ⅰ.酪氨酸標準曲線的繪制。精確稱取烘干的酪氨酸50mg，加入少量的0.2的鹽酸溶液溶解，定容至100ml。分別配置0、20、40、60、80u/ml的酪氨酸溶液，各取不同濃度的酪氨酸1ml，分別加入0.5%酪蛋白2ml，于37℃水浴中反應，然后加入10%三氯乙酸3ml，離心取上清液1ml，加入0.55mol/L碳酸鈉5ml，再加入福林-酚試劑（制備方法）1ml，于37℃水浴中顯色15分鐘，在680nm波長下比色，測光密度值（OD），以光密度值為縱坐標，酪氨酸濃度為橫坐標，繪制標準曲線圖。
Ⅱ.用腸道內(nèi)容物勻漿上清液來替代上述的酪氨酸，測定樣品的吸光度。
3 數(shù)據(jù)處理
3.1數(shù)據(jù)計算原理
3.1.1淀粉酶活力的計算
淀粉酶活力(u/g食糜)=(空白管光密度-測定管光密度)×800/(空白管光密度×腸內(nèi)容物重)
3.1.2脂肪酶活力的計算
脂肪酶活力(u/L)=(A1-A2)×因數(shù)/10
求因數(shù)的方法:取底物緩沖液4ml加0.9%氯化鈉50μl,420nm比色,讀取吸光度AS值,此AS值相當于標準管(454μmol/L)的濃度的吸
光度值,得出因數(shù)=36320/AS。
3.1.3蛋白酶活力的計算
用樣品的吸光度在賴氨酸標準曲線上查出相應的酪氨酸的濃度。我們以37℃，30分鐘水解蛋白產(chǎn)生1μg酪氨酸的酶量為1個酶活力。
3.2 實驗結(jié)果
數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標準誤（
3.2.1對腸道淀粉酶活性的影響
表3 對腸道淀粉酶活性的影響
注:相鄰字母表示P < 0.05,非相鄰字母表示P < 0.01,相同字母表示P >0.05
將對照組，抗生素組，大蒜素組分別在21，42日齡的腸道淀粉酶活力的數(shù)據(jù)利用EXCEL繪制折線圖如上：
分析:從表3和圖1們可以看出與對照組相比較,添加大蒜素的試驗組對十二指腸中酶活性有顯著的提高,尤其在21日齡的時候,大蒜素較對照組提高了122.88%（P <0.01）,抗生素組較對照組提高了42.96%（P >0.05）,在42日齡的時候,大蒜素組較對照組提高了68.07%（P <0.01）,而抗生素組較對照組提高了56.32%（P >0.05）。通過試驗結(jié)果可判斷在飼料中添加大蒜素對腸道淀粉酶活性的提高顯著高于抗生素。從這一方面可知大蒜素替代抗生素的可行性。
3.2.2對腸道脂肪酶活力的影
分析：從表4和圖2以看出，添加大蒜素的試驗雞較抗生素組和對照組的十二指腸脂肪酶活性都提高了，在21日齡的時候，大蒜素組較對照組提高了89.99%（P >0.05），較抗生素組提高了111.62%（P >0.05）；在42日齡的時候，大蒜素組比對照組提高了50.00%（P >0.05），比抗生素組提高了20.87%（P >0.05）；42日齡時各組的脂肪酶活性均比21日齡時低。從下表可見大蒜素對腸道脂肪酶活性的作用顯著高于抗生素組和對照組。
表4 對腸道脂肪酶活性的影響
、
注:相鄰字母表示P <0.05,非相鄰字母表示P <0.01,相同字母表示P >0.05
利用對照組，抗生素組，大蒜素組在21，42日齡腸道脂肪酶活力的數(shù)值分析得出以下結(jié)論。
3.2.3 對腸道總蛋白酶活性的影響
表5 對腸道總蛋白酶活性的影響
注:相鄰字母表示P <0.05,非相鄰字母表示P <0.01,相同字母表示P >0.05
利用上表對照組，抗生素組，大蒜素組在21，42日齡的腸道總蛋白酶活力的數(shù)值可分析得出以下結(jié)論。
分析：從表5和圖3們可以看出，添加大蒜素的試驗組在21日齡和42日齡腸道總蛋白酶活性都提高了，尤其是在21日齡，比對照組提高了10.29%（P >0.05），在42日齡時較對照組提高了1.702% （P >0.05），沒有抗生素組的效果明顯，抗生素組比對照組提高了34.37%（P >0.05）。但在21日齡的時候大蒜素對總蛋白酶的作用效果明顯好于抗生素。
4 分析與結(jié)論
4.1分析
家禽對飼料的消化可以分為物理，化學和微生物作用，其中通過消化酶進行的化學性的消化起了決定作用[8]，但由于肉仔雞生長快速的特點，使其自身常處于高度生理緊張，高度應激狀態(tài)，容易受飼料，飼養(yǎng)管理和環(huán)境的影響而導致消化道微生物群平衡紊亂和消化酶的分泌量或活性的不足[9][10]。本試驗通過添加160 mg/kg大蒜素能不同程度地提高土雞消化道淀粉酶，脂肪酶和總蛋白酶的活力,尤其是對腸道淀粉酶活力的影響更為明顯（P <0.01）。這可能是因為大蒜素的添加使土雞腸絨毛增多，變長并且排列整齊，腸壁增厚，有增強胃液分泌和胃腸蠕動，刺激食欲，有利于消化酶的分泌，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收[11]。
從酶的變化趨勢來看，對照組和抗生素組淀粉酶活力是升高的，而大蒜素組中土雞腸道淀粉酶活力是呈下降趨勢；腸道脂肪酶活力均呈下降趨勢，這于前人的報道:脂肪酶活力在21日齡時達到最大值，以后呈下降趨勢[12]是一致的。大蒜素組中的土雞腸道脂肪酶的活力的下降幅度大于抗生素組，但總的來說大蒜素對脂肪酶活力的增強效果是最好的，而在總蛋白酶活力的變化來看，對照組和大蒜素組土雞總蛋白酶活力呈下降趨勢，但大蒜素組總是大于對照組的總蛋白酶活力，抗生素組土雞腸道的總蛋白酶活力是呈上升趨勢的，并且從21日齡的不及大蒜素組變化到42日齡超過大蒜素組，這可能與大蒜素的濃度較低有一定的關(guān)系，總的來說大蒜素對土雞腸道酶活力有明顯的提高，這與土雞生產(chǎn)性能也是對應的。從而說明大蒜素是通過提高土雞腸道淀粉酶、脂肪酶、總蛋白酶活力來提高土雞腸道的消化水平進而提高土雞的生產(chǎn)性能的。
4.2結(jié)論
飼料中添加大蒜素能顯著提高十堰土種雞的性能，提高十二指腸脂肪酶淀粉酶和總蛋白酶的活力，對土雞的消化起到明顯作用，提高消化率。并且分析其市場價格和安全綠色等因素，比抗生素效果更加明顯，可以作為抗生素替代品，可以進行推廣
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