近年來，隨著研究和臨床觀察的深入發(fā)展，人們對某些維生素的本質(zhì)和作用有了進(jìn)一步的認(rèn)識。在一般情況下，機(jī)體通過進(jìn)食獲得維生素，以滿足身體的需要。但是，由于人們的生活、飲食、習(xí)慣、身體狀況的不同，可以導(dǎo)致食物中的維生素含量不足，吸收、利用發(fā)生障礙，或者額外增加對維生素的需求，從而出現(xiàn)維生素缺乏癥。或由于攝入過量而導(dǎo)致疾病。因此，定期對患者體內(nèi)維生素含量進(jìn)行監(jiān)測是非常必要的，目前常用的維生素檢測方法有比色法、色譜法、熒光法、微生物法等。
(一)維生素A
測定血清視黃醇可評價(jià)維生素A的營養(yǎng)狀況。測定視黃醇的最常用方法有分光光度法、熒光測定法及高效液相色譜法(HPLC)。
【檢測方法】三氯化銻比色法測定維生素A。維生素A與三氯化銻在三氯甲烷中作用，產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，其顏色深淺與溶液中維生素A的含量成正比。該藍(lán)色物質(zhì)雖不穩(wěn)定，但在規(guī)定時(shí)間內(nèi)可用分光光度計(jì)于620nm處測定其吸光度。
【參考區(qū)間】血清維生素A含量小于20ug／L為缺乏，20～30ug／L為可疑缺乏。
【評價(jià)】比色法適用于樣品中含維生素A高的樣品，快速、方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，樣品用量少，最低檢出量0．8ng。
(二)維生素E
血清、紅細(xì)胞、血小板和淋巴細(xì)胞中均可測到維生素E，最常用的標(biāo)本是血清。最常用的方法是熒光測定法和高效液相色譜法。
【檢測方法】熒光測定法測定維生素E。利用維生素E的共軛雙鍵體系，在一定波長光照射下可產(chǎn)生熒光，其熒光強(qiáng)度與濃度成正比。
一125—
【參考區(qū)間】成人血清維生素E(26．30+5．15)umol／L。
【評價(jià)1①樣品中與其他維生素共存的維生素E，用熒光法可不分離直接測定混合物中的維生素E；②該法操作簡便，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，是血清維生素E檢測較為理想的方法。維生素E含量在46．44mol／L以下時(shí)，校正曲線線性良好，丫：0．9999，平均回收率為103．6％，批內(nèi)CV為2．22％，批間CV為4．38％。
(三)維生素C
許多分析方法適用于維生素C營養(yǎng)狀況的檢測，最常用的方法是分光光度法和高效液相色譜法。
【檢測方法1直接碘量法測定維生素C。維生素C分子式為C6H8O6，分子量為176．1。用Iz標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定，I1將維生素C分子中的烯醇式結(jié)構(gòu)氧化為酮式結(jié)構(gòu)(圖6—1)。
圖6-1 I2氧化維生素C
根據(jù)I2標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和消耗的體積，計(jì)算樣品中維生素C的含量。用這種方法，不僅可以測定藥片中維生素C的含量，還可以測定血液、注射液、水果及蔬菜中維生素C的含量。
由于維生素C在空氣中易被氧化，特別是在堿性介質(zhì)中更易被氧化，故在測定時(shí)加入少量稀醋酸使溶液呈弱酸性，一般選在pH 3～4的弱酸性溶液中進(jìn)行滴定。
【參考區(qū)間】血清維生素C：28．4～79．5gmol／L(5~14mg／L)，<1 1．4um01／L(2mg／L)可出現(xiàn)癥狀。24小時(shí)尿中維生素C含量<20mg可診斷為維生素C缺乏。
【評價(jià)】①碘量法應(yīng)用范圍廣，既可測定氧化性物質(zhì)，又可測定還原性物質(zhì)。其缺點(diǎn)是I2易被空氣氧化和容易揮發(fā)；②碘量法測定維生素C的含量具有準(zhǔn)確度高、精密度好、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。
(四)維生素B2
維生素B2結(jié)構(gòu)中含核糖醇基與異咯嗪，在自然界中，維生素B2與磷酸結(jié)合，可形成黃素單核苷酸(FMN)，F(xiàn)MN再與腺嘌呤核苷酸結(jié)合，形成黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。維生素B、FMN和FAD都具有顯示綠黃色熒光，本身黃色，熒光遇強(qiáng)酸或強(qiáng)堿減弱的特性。
【檢測方法1熒光法測定維生素B2。一定波長光照射維生素B2可產(chǎn)生熒光。在稀溶液中，其熒光強(qiáng)度與濃度成正比。
【參考區(qū)間】血清維生素B。含量<1401【參考區(qū)間】成人血清維生素E(26．30+5．15)umol／L。
【評價(jià)1①樣品中與其他維生素共存的維生素E，用熒光法可不分離直接測定混合物
中的維生素E；②該法操作簡便，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，是血清維生素E檢測較為理想的
方法。維生素E含量在46．44mol／L以下時(shí)，校正曲線線性良好，丫：0．9999，平均回收率為
103．6％，批內(nèi)CV為2．22％，批間CV為4．38％。
(三)維生素C
許多分析方法適用于維生素C營養(yǎng)狀況的檢測，最常用的方法是分光光度法和高效液相色譜法。
【檢測方法1直接碘量法測定維生素C。維生素C分子式為C6H8O6，分子量為176．1。用I2標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定，I2將維生素C分子中的烯醇式結(jié)構(gòu)氧化為酮式結(jié)構(gòu)(圖6—1)。
圖6-1 I：氧化維生素C
根據(jù)I2標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和消耗的體積，計(jì)算樣品中維生素C的含量。用這種方法，不僅可以測定藥片中維生素C的含量，還可以測定血液、注射液、水果及蔬菜中維生素C的含量。
由于維生素C在空氣中易被氧化，特別是在堿性介質(zhì)中更易被氧化，故在測定時(shí)加入少量稀醋酸使溶液呈弱酸性，一般選在pH 3～4的弱酸性溶液中進(jìn)行滴定。
【參考區(qū)間】血清維生素C：28．4～79．5gmol／L(5~14mg／L)，<1 1．4um01／L(2mg／L)可出現(xiàn)癥狀。24小時(shí)尿中維生素C含量<20mg可診斷為維生素C缺乏。
【評價(jià)】①碘量法應(yīng)用范圍廣，既可測定氧化性物質(zhì)，又可測定還原性物質(zhì)。其缺點(diǎn)是I2易被空氣氧化和容易揮發(fā)；②碘量法測定維生素C的含量具有準(zhǔn)確度高、精密度好、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。
(四)維生素B：
維生素B2結(jié)構(gòu)中含核糖醇基與異咯嗪，在自然界中，維生素B2與磷酸結(jié)合，可形成黃素單核苷酸(FMN)，F(xiàn)MN再與腺嘌呤核苷酸結(jié)合，形成黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。維生素B2、FMN和FAD都具有顯示綠黃色熒光，本身黃色，熒光遇強(qiáng)酸或強(qiáng)堿減弱的特性。
【檢測方法1熒光法測定維生素B2一定波長光照射維生素B2可產(chǎn)生熒光。在稀溶液中，其熒光強(qiáng)度與濃度成正比。
【參考區(qū)間】血清維生素B2含量<140／L為缺乏，>200【參考區(qū)間】成人血清維生素E(26．30+5．15)umol／L。
【評價(jià)1①樣品中與其他維生素共存的維生素E，用熒光法可不分離直接測定混合物中的維生素E；②該法操作簡便，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，是血清維生素E檢測較為理想的方法。維生素E含量在46．44mol／L以下時(shí)，校正曲線線性良好，-0．9999，平均回收率為103．6％，批內(nèi)CV為2．22％，批間CV為4．38％。
(三)維生素C
許多分析方法適用于維生素C營養(yǎng)狀況的檢測，最常用的方法是分光光度法和高效液
相色譜法。
【檢測方法1直接碘量法測定維生素C。維生素C分子式為C6H8O6，分子量為176.1。
用I2標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定，I2將維生素C分子中的烯醇式結(jié)構(gòu)氧化為酮式結(jié)構(gòu)(圖6—1)。
圖6-1 I2氧化維生素C
根據(jù)12標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和消耗的體積，計(jì)算樣品中維生素C的含量。用這種方法，不僅
可以測定藥片中維生素C的含量，還可以測定血液、注射液、水果及蔬菜中維生素C的含量。
由于維生素C在空氣中易被氧化，特別是在堿性介質(zhì)中更易被氧化，故在測定時(shí)加入
少量稀醋酸使溶液呈弱酸性，一般選在pH 3～4的弱酸性溶液中進(jìn)行滴定。
【參考區(qū)間】血清維生素C：28．4～79．5gmol／L(5~14mg／L)，<1 1．4umol／L(2mg／L)可
出現(xiàn)癥狀。24小時(shí)尿中維生素C含量<20mg可診斷為維生素C缺乏。
【評價(jià)】①碘量法應(yīng)用范圍廣，既可測定氧化性物質(zhì)，又可測定還原性物質(zhì)。其缺點(diǎn)是I2易被空氣氧化和容易揮發(fā)；②碘量法測定維生素C的含量具有準(zhǔn)確度高、精密度好、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。
(四)維生素B2
維生素B2結(jié)構(gòu)中含核糖醇基與異咯嗪，在自然界中，維生素B2與磷酸結(jié)合，可形成黃素單核苷酸(FMN)，F(xiàn)MN再與腺嘌呤核苷酸結(jié)合，形成黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。維生素B2、FMN和FAD都具有顯示綠黃色熒光，本身黃色，熒光遇強(qiáng)酸或強(qiáng)堿減弱的特性。
【檢測方法1熒光法測定維生素B2一定波長光照射維生素B2可產(chǎn)生熒光。在稀溶液中，其熒光強(qiáng)度與濃度成正比。
【參考區(qū)間】血清維生素B。含量<140ug／L為缺乏，>200ug／L為良好。
【評價(jià)1分子熒光光譜法具有靈敏度高和選擇性好的特性。其檢測下限通?？蛇_(dá)0．1～0.001ug/ml
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總之，維生素的檢測可以用分光光度法、熒光測定法和HPLC等進(jìn)行檢測，也可以通過
以乳酸菌為主的微生物定量法。
注：華南標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)-國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采購平臺
