1.血清鐵和總鐵結(jié)合力測定鐵是人體必需的微量元素。70kg的人體內(nèi)含鐵化合物中鐵的總量約為3270mg,占體重的0.047‰。血清中的鐵以形式與運鐵蛋白結(jié)合。所以在測定血清鐵含量時,需首先使Fe。’與運鐵蛋白分離。血清鐵的測定尚缺少權(quán)威性方法。原子吸收法儀器設(shè)備復雜,費用昂貴,且沒有分光光度法可靠性好,很少在實驗室中用來做血清鐵的常規(guī)分析。比色法仍然是測定血清鐵的主要方法。
【檢測方法】亞鐵嗪比色法測定血清鐵和總鐵結(jié)合力。血清中的鐵與運鐵蛋白結(jié)合成復合物,在酸性介質(zhì)中鐵從復合物中解離出來,被還原劑還原成二價鐵,再與亞鐵嗪直接作用生成紫紅色復合物,與同樣處理的鐵標準液比較,即可求得血清鐵含量??傝F結(jié)合力(total iron binding capac時,TIBC)是指血清中運鐵蛋白能與鐵結(jié)合的總量。將過量鐵標準液加到血清中,使之與未帶鐵的運鐵蛋白結(jié)合,多余的鐵被輕質(zhì)碳酸鎂粉吸附除去,然后測定血清中的總鐵含量,即為總鐵結(jié)合力。
【參考區(qū)間】血清鐵:成年男性1l~30umol/L(600~1700ug/L);成年女性9~27umol/L(500~1500ug/L)。血清總鐵結(jié)合力:成年男性50~77umol/L,(2800~4300~ug/L)成年女性54~77gmol/L(3000~4300~tg/L)。
【評價】 線性:在140umol/L以下線性良好,符合Beer定律。批內(nèi)精密度(n=20),測定范圍18.45~19.2umol/L, 17.92pmol/L,S:0.3lmol/L,Cv:3.01%。血清TIBC, :61.51umol/L,,S:2.15umol/L,CV:3.5%。批間CV:2.56%回收試驗:回收率98.3%~100.56%。干擾試驗:Hb>250mg/L,時結(jié)果偏高1%~5%。膽紅素102.6~171gmol/L時結(jié)果升高1.9%~2.8%。甘油三酯5.65umol/L時結(jié)果升高5.6%。銅31.4umol/L時結(jié)果升高0.33gmol/L,在生理條件下銅與銅藍蛋白結(jié)合,故對鐵的測定基本上無干擾。
2.血清鋅測定鋅是人體主要的微量元素之一,成人體內(nèi)含鋅2~3g。血清鋅的主要測定方法有原子吸收分光光度法、中子活化法和吡啶偶氮酚比色法。下面介紹吡啶偶氮酚比色法測定血清鋅。
【檢測方法】吡啶偶氮酚比色法測定血清鋅。血清中的高價鐵及銅離子被維生素C還原成低價,兩者均能同氰化物生成復合物而掩蔽。鋅也和氰化物結(jié)合,但水合氯醛能選擇性地釋放鋅,使鋅與2-[(5-溴-2一吡啶)-偶氮]一5-二乙基氨基苯酚(5-B-PADAP)反應(yīng)生成紅色復合物,與同樣處理的標準品比較,求得血清鋅含量。
【參考區(qū)間】成人血清鋅9.0~20.7umol/[(590~1350ug/L)。
【評價】批內(nèi)CV 3.05%~3.08%,批間CV 2.97%~3.12%。
3.血清銅測定銅是人體必需微量元素之一,正常人體內(nèi)含銅80~100mg,其中95%的銅與肝臟生成的%一球蛋白結(jié)合,形成銅藍蛋白,銅藍蛋白是運輸銅的基本載體。臨床血清銅的測定方法主要有原子吸收分光光度法和比色法。
【檢測方法】用雙環(huán)己酮草酰二腙比色法測定血清銅。加稀鹽酸于血清中,使血清中與-蛋白質(zhì)結(jié)合的銅游離出來,再用三氯醋酸沉淀蛋白質(zhì),濾液中的銅離子與雙環(huán)己酮草酰二腙反應(yīng),生成穩(wěn)定的藍色化合物,與同樣處理的標準液比較,即可求得血清銅含量。
【參考區(qū)間】成年男性1 0.99~2 1.98umol/L(700~1400ug/L);成年女性1 2.56~23.55umol/L,(800~1500ug/L)。
【評價】本法線性范圍可達62.8umol/[。。雙環(huán)己酮草酰二腙與銅反應(yīng)生成的有色絡(luò)合物,在水溶液中的摩爾吸光系數(shù)為16000L/(mol·cm)。本法顯色穩(wěn)定,顯色后在4~20℃可穩(wěn)定1小時,特異性高。
4.血清鉛測定 目前用于測定血鉛含量的方法主要有:石墨爐原子吸收法、等離子發(fā)
射光譜法、陽極溶出伏安法、火焰原子吸收光譜法等。
【檢測方法】石墨爐原子吸收光譜法測定血清鉛。血樣用Triton X-100作基體改進劑,溶血后用硝酸處理,用石墨爐原子吸收光譜法在283.3nm處測定鉛的含量。
【參考區(qū)間】成人血鉛<100gg/L。
【評價】最低檢測濃度為3mg/L,回收率為95.1%~103.2%,精密度CV:3.7%~5.0%。血中3倍治療量的EDTA及3倍于正常值的NaCl、 對測定無影響。在測定過程中,灰化溫度、干燥和時間的選擇很重要,要防止樣品飛濺,因石墨管的阻值不同,更換石墨管道的阻值作校正曲線。