摘要 建立高效液相色譜儀測定鹽酸雷尼替丁制劑含量的檢測方法。 采用磷酸鹽緩沖液與乙腈等比混合的流動(dòng)相等度洗脫，于 314 nm 檢測，外標(biāo)法定量。 鹽酸雷尼替丁質(zhì)量濃度在 5～500 μg／mL 范圍內(nèi)與色譜峰面積線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)大于 0.999 9。 6 次測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.85%，加標(biāo)回收率為 (100±2)%。 該法操作簡便、清潔高效、準(zhǔn)確可靠，可用于鹽酸雷尼替丁片和膠囊含量的測定。
鹽酸雷尼替丁是應(yīng)用廣泛的治療潰瘍病的藥品， H2 受體阻斷劑，主治組胺誘發(fā)的胃部疾病，多用于緩解胃酸過多所致的胃痛、返酸等癥狀［1］。
目前檢測雷尼替丁多采用紫外分光光度法［2］或液相色譜法［1,3–4］，廣東省藥檢所建立的 HPLC 測定雷尼替丁含量的方法［5］成為雷尼替丁制劑藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［6］，其含量測定用磷酸與氫氧化鈉反應(yīng)配制磷酸鹽緩沖液，還需調(diào)節(jié) pH 值，并與乙腈按不同比例混合分別配制成流動(dòng)相 A 和 B，以一定流速進(jìn)行梯度洗脫，整個(gè)實(shí)驗(yàn)約需 30 min，耗時(shí)較長，效率低下。
筆者對制劑藥品中雷尼替丁含量測定方法進(jìn)行了改進(jìn)，藥典增補(bǔ)本中規(guī)定使用 230 nm 進(jìn)行含量測定，但藥品合成所用原料及副產(chǎn)品的雜質(zhì)在此波長也有吸收［7］，所以需要梯度洗脫以實(shí)現(xiàn)較高的分離度。 雷尼替丁藥品中的雜質(zhì)在 314 nm 無吸收，在此波長下采用磷酸鹽緩沖液與乙腈等比混合的流動(dòng)相等度洗脫，僅需約 5 min，不僅提高了工作效率，降低對液相色譜儀的要求，而且減少了試劑使用量，降低了檢驗(yàn)成本。
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 主要儀器與試劑
高 效 液 相 色 譜 儀： Waters H–Class 型， 美 國Waters 公司；
紫外分光光度計(jì)： UV2501PC 型，日本島津公司；
電子天平： XS205DU 型，瑞士梅特勒 – 托利多集團(tuán)；
鹽酸雷尼替丁對照品：批號(hào)為 100179–201105，按 C13H22N4O3S · HCl 計(jì)含量為 99.8%，中國藥品生物制品檢定所；
鹽酸雷尼替丁制劑樣品： （1）鹽酸雷尼替丁膠囊，批號(hào) 20121201，山西昂生藥業(yè)有限責(zé)任公司，（2）鹽酸雷尼替丁片，批號(hào) 121203，廣州歐化藥業(yè)有限公司，規(guī)格均為 0.15 g ；
NaOH， KH2PO4 ：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；
磷酸鹽緩沖液： 稱取 1 g KH2PO4 于 1 L 水中，溶解后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 值至中性；
實(shí)驗(yàn)用水為電阻率不大于 18.25 MΩ · cm 的超純水。
1.2 色譜條件
色譜柱： 反相 C18 柱 (150 mm×4.6 mm，5μm，美國 Waters 公司 )，柱溫： 30℃；等度洗脫流動(dòng)相：乙腈 – 磷酸鹽緩沖液 （體積比為 50∶50）；流動(dòng)相流速： 1 mL／min ；進(jìn)樣體積： 10 μL ；檢測波長： 314nm，230 nm ；定量方式：峰面積外標(biāo)法。
2 結(jié)果與討論
2.1 色譜條件選擇
圖 1 為雷尼替丁的紫外吸收光譜圖，由圖 1 可見，雷尼替丁在 230 nm 和 314 nm 波長處有最大吸收。
稱取 12.1 mg 鹽酸雷尼替丁對照品于 10 mL 容量瓶中，加入 50% 氫氧化鈉溶液 100 μL 及水約 6mL，振搖使溶解，用水定容，室溫放置 1 h 后取 10μL 注入液相色譜儀，進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，采用梯度洗脫，230 nm 及 314 nm 雙波長檢測，色譜圖分別如圖 2，圖 3 所示。
圖 2 中雷尼替丁峰與雜質(zhì)峰的分離度為 5.9，符合藥典規(guī)定的二者分離度大于 4.0 的系統(tǒng)適用性要求。 圖 3 表明雜質(zhì)在 314 nm 處無吸收，在此波長下檢測可采取等度洗脫。 另外，于 314 nm 檢測色譜圖基線比于 230 nm 檢測更加平穩(wěn)，表明雷尼替丁在314 nm 檢測時(shí)受末端吸收的干擾更少，更利于準(zhǔn)確積分。 另外由于 C18 鏈在水相中不易保持伸展?fàn)顟B(tài)，
C18 鏈的隨機(jī)卷曲會(huì)導(dǎo)致組分保留值變化，造成反相色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定，所以流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例通常應(yīng)不低于 5%［8］，但藥典增補(bǔ)版為了提高分離度而使用 2% 乙腈，這可能損傷色譜柱填料。 提高有機(jī)相比例可避免這種水相過高造成的損傷。 采用體積比為 1∶1 的磷酸鹽緩沖液 – 乙腈作流動(dòng)相，等度洗脫，于 314 nm 檢測樣品，色譜圖見圖 4，雷尼替丁保留時(shí)間約為 3.8 min，在 5 min 內(nèi)可全部洗脫出，且峰形尖銳，對稱因子為 1.8。
2.2 線性方程
稱取 50 mg 鹽酸雷尼替丁至 50 mL 容量瓶中，用水定容作為母液，質(zhì)量濃度為 1 mg／mL，用此母液配制質(zhì)量濃度分別為 5，10，20，30，50，100，500μg／mL 共 7 種標(biāo)準(zhǔn)溶液，以最小二乘法將濃度與色譜峰面積進(jìn)行一階線性擬合，計(jì)算得到的曲線方程為 A=27 864.6c–9 743.4，相關(guān)系數(shù)近似為 1.000 0，表明雷尼替丁的質(zhì)量濃度與色譜峰面積在 5～500μg／mL 范圍內(nèi)成線性關(guān)系且相關(guān)性良好。
2.3 精密度及回收率
取 20 粒雷尼替丁膠囊樣品的內(nèi)容物混勻，精密稱取 27.4 mg 樣品細(xì)粉，置于 100 mL 容量瓶中，加適量水并超聲溶解后定容，按 1.2 色譜條件連續(xù)測定 6 次，測定結(jié)果見表 1。
由 表 1 可 知， 測 定 結(jié) 果 的 相 對 標(biāo) 準(zhǔn) 偏 差 為0.85%，精密度符合質(zhì)控要求。分別精密量取上述樣品處理液 10 mL 至 5 只50 mL 容量瓶中并編號(hào)，再依次分別精密加入 1，2，5，10，20 mL 的 1 mg／mL 的雷尼替丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水定容，本底值為 40.5 μg／mL。 按 1.2 色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表 2。 由表 2 可知，不同加標(biāo)水平的回收率均在 （100±2）% 內(nèi)，表明方法的準(zhǔn)確度較高。
2.4 比對試驗(yàn)
取鹽酸雷尼替丁片劑、膠囊劑樣品，分別采用本法及標(biāo)準(zhǔn)方法測定雷尼替丁的含量，測定結(jié)果見表 3。 由表 3 可知，兩種方法測定結(jié)果基本吻合。
3 結(jié)語
制劑中常見的雜質(zhì)在 314 nm 波長下無響應(yīng)，不會(huì)干擾雷尼替丁的檢測，所以在此波長下可不必采用梯度洗脫以分離雜質(zhì)，等度洗脫雷尼替丁約 3.8min 出峰，采用外標(biāo)法定量，在 5～500 μg／mL 曲線線性范圍內(nèi)可方便地測定各種濃度的試樣。 此法操作簡便、準(zhǔn)確可靠、清潔高效，利于保護(hù)色譜柱，可用于控制鹽酸雷尼替丁制劑的質(zhì)量。
參 考 文 獻(xiàn)
［1］ 郝明，徐海燕，王璇，等 . 血漿中雷尼替丁和鉍的藥動(dòng)學(xué)和生物等效性研究［J］. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010(10): 167–170.
［2］ 袁國文，金文麗，隆旭紅，等 . 紫外 – 可見分光光度法測定鹽酸雷尼替丁膠囊含量的不確定度評定［J］. 藥物分析雜志，2011，31(3): 579–582.
［3］ 朱濤，楊更亮，姜明明，等 . 弱陽離子整體柱在線富集分析尿液中鹽酸雷尼替丁［J］. 分析化學(xué)，2008，36(7): 895–899.
［4］ 沙吉達(dá) . 鹽酸雷尼替丁有關(guān)物質(zhì)的高效液相分析法［J］. 海峽藥學(xué)，2005，17(2): 48–50.
［5］ 嚴(yán)全鴻，羅卓 . HPLC 法測定枸櫞酸鉍雷尼替丁及其片劑中雷尼替丁的含量［J］. 藥物分析雜志，2011，31(12): 2 249–2 251.
［6］ 國家藥典委員會(huì) . 中華人民共和國藥典第一增補(bǔ)本［M］. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010 ：附錄 54.
［7］ 陳杰，鄭子棟，李潔 . 鹽酸雷尼替丁膠囊的質(zhì)量分析［J］. 藥物分析雜志，2010，30(11): 21 60–2 163.
［8］ 于世林 . 高效液相色譜方法及應(yīng)用 ［M］ . 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2006: 29
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