一、吸光光度分析法
吸光光度分析法一般只適應(yīng)于微量組分的測定，當(dāng)待測組分含量高時，吸光度超出了準(zhǔn)確測定的讀數(shù)范圍，準(zhǔn)確度就會降低，采用示差光度法可以彌補。示差光度法和普通吸光光度法的主要區(qū)別是參比溶液不同，它采用比待測溶液濃度稍低的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液，測量待測試液的吸光度。根據(jù)朗伯一比耳定律，用A對c作圖時應(yīng)為直線關(guān)系，但如果單色光不純、介質(zhì)不均勻（如濃液中有膠體粒子存在，會引起光的散射）或因化學(xué)變化所致（如有色質(zhì)點的離解，締合或形成新的配合物，會改變有色物質(zhì)的濃度）都會引起偏離朗伯一比耳定律。
二、銨的測定
微量銨的測定常采用標(biāo)準(zhǔn)系列法。NH4+與奈氏試劑（K2HgI4的強堿性溶液）作用，生成棕黃色的膠體溶液，反應(yīng)為：
NH4+＋2[HgI4]2-＋4OH-=[Hg2ONH2]I＋7I-＋3H2O
溶液顏色深淺與NH4+的濃度成正比。
根據(jù)上述原理，測定時先制備標(biāo)準(zhǔn)色階，同時在相同條件下使NH4+的試樣溶液顯色，然后在比色管中比色測定。
在進行測定時，所用的蒸餾水應(yīng)加入堿和高錳酸鉀進行重蒸餾，以除去蒸餾水中的微量按。如果有Ca2+、Mg2+等存在時，對測定有干擾，可加入酒石酸鹽進行掩蔽。另外，還應(yīng)加入阿拉伯膠保護膠體，使膠體溶液穩(wěn)定。
三、鐵的測定
微量鐵的測定根據(jù)所用顯色劑的不同，有鄰二氮菲法、磺基水楊酸法、硫氰酸鹽法等。目前最常用的是鄰二氮菲法。此法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，F(xiàn)e2+與鄰二氮菲生成穩(wěn)定的橘紅色配合物。
生成配合物的摩爾吸光系數(shù)ε為1.1×104。在pH=2~9范圍內(nèi)都能顯色，且顏色深度與溶液酸度無關(guān)，為了減小其他離子的影響，通常顯色反應(yīng)在微酸性(pH=5)溶液中進行。Fe3+也能與鄰二氮菲反應(yīng)生成淡藍色配合物，若鐵以Fe3+形式存在，則可預(yù)先用鹽酸羥胺（或?qū)Ρ蕉樱⑵溥€原，其反應(yīng)為：
2Fe3+ +2NH2OH·HCl=2Fe2++N2↑＋2H2O+4H+ +2Cl-
利用上述顯色反應(yīng)在完全相同的條件下使Fe3+的標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液顯色，然后用分光光度計在508nm波長下測其吸光度，作出工作曲線，求出待測試液中鐵的含量。該法選擇性很高，相當(dāng)于鐵含量40倍的Sn2+、A13+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Si2O2-3；20倍的Cr3+、Mn2+、PO3-4，5倍的Co2+、Cu2+均不干擾測定。
四、磷的測定
利用吸光光度分析法，使用721型或722型分光光度計可以測定樣品中磷含量，如植株中的全磷、土壤速效磷、血清中的無機磷、飼料中的總磷量的測定，食品加工中品質(zhì)改良劑——焦磷酸鹽、總磷酸鹽、游離磷酸鹽和結(jié)合磷的測定也可以采用吸光光度分析法。
微量磷的測定一般采用鉬藍法。在酸性溶液中，磷酸鹽與鉬酸銨作用生成黃色磷鉬酸，其反應(yīng)為：
PO43-+12MoO42- ＋27H+?H7[P(Mo2O7)6］（黃）+10H2O
在一定酸度下，加入適量的還原劑將磷鉬酸還原為磷鉬藍，使溶液呈深藍色。
藍色的深淺與磷的含量成正比。
磷鉬藍法所用的還原劑為氯化亞錫或抗壞血酸。用SnCl2作還原劑，反應(yīng)靈敏度高，顯色快，但藍色顯色時間短，對酸度和鉬酸銨的濃度要求比較嚴格，干擾離子較多。用抗壞血酸作還原劑，反應(yīng)靈敏度高，穩(wěn)定時間長，反應(yīng)要求的酸度范圍寬（c(H+）為0.48~1.44mol?L-1)，F(xiàn)e3+，AsO3-4、Si2O32-干擾較小，但顯色速率慢，需要在沸水浴中加熱。實際測定時，也常用抗壞血酸氯化亞錫分光光度法，即在加入氯化亞錫前，先加入少量抗壞血酸，這樣不但可以消除大量Fe3+的干擾，增加鉬藍的穩(wěn)定性，而且能使顯色在室溫下進行，簡化操作手續(xù)。磷的含量為0.05~2.0mg?kg-1時，符合朗伯一比耳定律，生成的鉬藍在650nm波長下有最大吸收，故可在此波長下測定其吸光度。
