一、活性要求及測(cè)定方法
1.酶活性測(cè)定
1.1淀粉酶活性側(cè)定
淀粉為底物,以Nelson/Somogyi還原糖測(cè)試淀粉酶活性(U/mL);10000+1000(1個(gè)酶活力單位定義為:40℃,pH6.5時(shí),每分鐘釋放1μmol還原糖所需要的酶量)。
以對(duì)硝基苯基麥芽糖為底物測(cè)試淀粉酶活性(Ceralpha)(U/mL):3000+300(1個(gè)酶活力單位定義為:40℃,pH6.5時(shí),每分鐘釋放1μmol對(duì)硝基苯基所需要的酶量)。
1.2蛋白酶活性測(cè)定
酪蛋白測(cè)試蛋白酶活性:300一400U/mL[1個(gè)酶活力單位定義為:40℃,pH8.0時(shí),每分鐘從可溶性酪蛋白中水解出(并溶于三氯乙酸)1μmol酪氨酸所需要的酶量];或7一15U/mg[1個(gè)酶活力單位定義為:37℃,pH7.5時(shí),每分鐘從酪蛋白中水解得到一定量的酪氨酸(相當(dāng)于1.0pmol酪氨酸在顯色反應(yīng)中所引起的顏色變化,顯色用Folin一Ciocalteau試劑)時(shí)所需要的酶量]。
偶氮一酪蛋白測(cè)試蛋白酶活性(U/mL);300一400[l內(nèi)肽酶活力單位定義為:40℃,pH8.0時(shí),每分鐘從可溶性酪蛋白中水解出(并溶于三氯乙酸)1μmol酪氨酸所需要的酶量]。
1.3淀粉葡萄糖苷酶活性側(cè)定
淀粉/葡萄糖氧化酶一過(guò)氧化物酶法測(cè)試淀粉葡萄糖苷酶活性(U/mL);2000一3300[l個(gè)酶活力單位定義為:40℃,pH4.5時(shí),每分鐘釋放1μmol葡萄糖所需要的酶量]。
對(duì)一硝基苯基一麥芽糖苷(PNPBM)法測(cè)試淀粉葡萄糖昔酶活性(U/mL):130一200[l個(gè)酶活力單位定義(1PNP單位)為:40℃時(shí),有過(guò)量的1β-葡萄糖苷酶存在下,每分鐘從對(duì)一硝基苯基-β一麥芽糖苷釋放1μmol對(duì)一硝基苯基所需要的酶量]。
2.干擾酶
市售熱穩(wěn)定a一淀粉酶、蛋白酶一般不易受到其他酶的干擾,蛋白酶制備時(shí)可能會(huì)混入極低含量的β一葡聚糖酶,但不會(huì)影響總膳食纖維測(cè)定。本法中淀粉葡萄糖普酶易受污染,是活性易受干擾的酶。淀粉葡萄糖普酶的主要污染物為內(nèi)纖維素酶,能夠?qū)е卵帑溁虼篼溨笑乱黄暇厶莾?nèi)部混合鍵解聚。淀粉葡萄糖苷酶是否受內(nèi)纖維素酶的污染很容易檢測(cè)。
二、判定標(biāo)準(zhǔn)
當(dāng)酶的生產(chǎn)批次改變或最長(zhǎng)使用間隔超過(guò)6個(gè)月時(shí),應(yīng)按下表所列標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行校準(zhǔn),以確保所使用的酶達(dá)到預(yù)期的活性,不受其他酶的干擾。