高錳酸鉀滴定法稱為貝爾德藍(lán)(Bertrand)法。其原理是先將一定量的樣液與一定量過(guò)量的堿性酒石酸銅溶液混合,還原糖將二價(jià)銅還原為氧化亞銅,經(jīng)過(guò)濾,得到氧化亞銅沉淀,再加入過(guò)量的酸性硫酸鐵溶液將其氧化溶解,而三價(jià)鐵鹽被定量地還原為亞鐵鹽,然后用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定所生成的亞鐵鹽,根據(jù)高錳酸鉀溶液消耗量可計(jì)算出氧化亞銅的量,再?gòu)臋z索表中查出與氧化亞銅量相當(dāng)?shù)倪€原糖量,即可計(jì)算出樣品中還原糖含量。
本法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法,適用于各類食品中還原糖的測(cè)定,有色樣液也不受限制。方法的準(zhǔn)確度高,重現(xiàn)性好,準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性都優(yōu)于直接滴定法。但操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí),需使用特制的高錳酸鉀法糖類檢索表。
樣品處理的方法同上述還原糖法。測(cè)定時(shí)將處理后的樣品溶液倒入400mL燒杯中,加入堿性酒石酸銅甲液及乙液,于燒杯上蓋一表面皿,加熱,控制在4min內(nèi)沸騰,再準(zhǔn)確煮沸2min,趁熱用鋪好石棉的古氏增禍或垂融柑渦抽濾,并用60℃熱水洗滌燒杯及沉淀,至洗液不呈堿性為止。將古氏坩堝或垂融坩堝放回原400mL燒杯中,加硫酸鐵溶液及水,用玻璃棒攪拌使氧化亞銅完全溶解,以0.02mol/L高猛酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色為終點(diǎn),記錄高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗量。
以水為對(duì)照,加與測(cè)樣品測(cè)定時(shí)相同量的堿性酒石酸銅甲液、乙液,硫酸鐵及水,按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。
測(cè)定結(jié)果按下式計(jì)算:
X1=(V一V0)×C×71.54
式中:X1—樣品中還原糖質(zhì)量相當(dāng)于氧化亞銅的質(zhì)量,mg;
V—測(cè)定用樣品液消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,mL;
V0—試劑空白消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,mL;
C—高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度,moL/L;
71.54—1mL高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(1/5KMnO4)=1.000moL/L],相當(dāng)于氧化亞銅的質(zhì)量,mg。
根據(jù)上式中計(jì)算所得的氧化亞銅質(zhì)量,查附錄“氧化亞銅質(zhì)量相當(dāng)于葡萄糖、果糖、乳糖、轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量表”,再計(jì)算樣品中還原糖的含量。
X2=m1/[m2×(V1/250)×1000]×100
式中:X2—樣品中還原糖含量,g/100g;
m1—查表得還原糖質(zhì)量,mg;
m2—樣品質(zhì)量(或體積),g(mL);
V1—測(cè)定用樣品處理液的體積,mL;
250—樣品處理后的總體積,mL。