生物指示劑出現(xiàn)假陽性的原因分析及防范
胡秀鳳,張莉莉,楊 潔,周新鳳
(江蘇省鎮(zhèn)江市第三人民醫(yī)院,江蘇鎮(zhèn)江, 212000)
關(guān)鍵詞:生物指示劑;假陽性;電熱恒溫水溫箱;試管裂痕
2007年2月,鎮(zhèn)江市第三人民醫(yī)院供應(yīng)室新 添置了一臺(tái)脈動(dòng)真空矩型壓力蒸汽滅菌器,在起 用前進(jìn)行試運(yùn)行監(jiān)測(cè),每次均進(jìn)行工藝監(jiān)測(cè)、化學(xué) 監(jiān)測(cè)和生物監(jiān)測(cè)。在監(jiān)測(cè)過程中,有6個(gè)鍋次的 工藝監(jiān)測(cè)、化學(xué)監(jiān)測(cè)達(dá)到規(guī)定要求,而生物監(jiān)測(cè)結(jié) 果卻為陽性。生物監(jiān)測(cè)是通過標(biāo)準(zhǔn)化的菌株和合 乎要求的抗力來考核整個(gè)負(fù)荷是否達(dá)到滅菌合格 的要求,是滅菌效能測(cè)定的直接而可靠的方法及 指標(biāo)[1-2]。監(jiān)測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)時(shí),任何生物指示劑呈 陽性結(jié)果,均應(yīng)認(rèn)為滅菌失敗。為此,作者對(duì)滅菌 的每一個(gè)環(huán)節(jié)仔細(xì)分析,查找存在的原因,最終發(fā) 現(xiàn),是因嗜熱脂肪桿菌芽胞污染了電熱恒溫水溫 箱內(nèi)的水,然后再進(jìn)入有裂痕的滅菌后生物指示 劑試管內(nèi)所致,造成了生物指示劑的假陽性結(jié)果。 經(jīng)文獻(xiàn)檢索,未有相同報(bào)告,此現(xiàn)象雖不多見,但 不可忽視,現(xiàn)報(bào)告如下。
1 材料與方法
新添置的脈動(dòng)真空矩型壓力蒸汽滅菌器是由 江蘇省張家港市華菱醫(yī)療設(shè)備制造有限公司生 產(chǎn),型號(hào)為YXQ.MG-210。試運(yùn)行監(jiān)測(cè)時(shí),每個(gè) 鍋次均進(jìn)行B-D試驗(yàn)、化學(xué)指示卡、指示膠帶、 留點(diǎn)溫度計(jì)200℃和生物指示劑測(cè)試。生物指示 劑為自含式嗜熱脂肪桿菌芽胞生物指示劑,由中 國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所研制,北 京四環(huán)衛(wèi)生藥械廠有限公司出品的四環(huán)牌ME- 壓力蒸汽滅菌生物指示劑,含菌量為5×105~5 ×106cfu/片,在121℃±0.5℃飽和蒸汽條件 下,存活時(shí)間≥3.9 min,殺滅時(shí)間≤19 min;指 示膠帶、化學(xué)指示卡是壓力蒸汽滅菌指示膠帶、化 學(xué)指示卡,均為132℃指示(由3M公司提供);標(biāo) 準(zhǔn)試驗(yàn)包是用16條自制的全棉手術(shù)巾包扎成23 cm×23 cm×15 cm[2]; BD測(cè)試包為一次性B-D 測(cè)試包(由3M公司提供)。
生物監(jiān)測(cè)方法:根據(jù)2006年江蘇省頒布的 《消毒供應(yīng)中心(室)建設(shè)管理規(guī)范》的要求,將2 個(gè)自含式嗜熱脂肪桿菌芽胞生物指示劑置于標(biāo)準(zhǔn) 試驗(yàn)包中心部位,將標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包置于滅菌柜內(nèi)排 氣口上方[3],經(jīng)過一個(gè)滅菌周期后,將生物指示 劑試管取出,在室溫下放置10 min左右,將管內(nèi) 安瓿夾碎,浸沒菌片,充分搖勻,連同陽性對(duì)照管, 一起置于56℃電熱恒溫水溫箱內(nèi), 48 h觀察結(jié) 果。
生物監(jiān)測(cè)的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):若生物指示劑試 管內(nèi)培養(yǎng)基不變色,且陽性對(duì)照管變黃色,表示滅 菌合格;若生物指示劑試管內(nèi)培養(yǎng)基變黃色,同陽 性對(duì)照管的黃色一致,表示滅菌不合格。2支同 時(shí)滅菌的生物指示劑只要其中有一支陽性也視為 滅菌不合格。
2 測(cè)試結(jié)果
在整個(gè)測(cè)試過程中,工藝檢測(cè)不合格3次,化 學(xué)檢測(cè)不合格4次,生物檢測(cè)不合格13次,3項(xiàng) 檢測(cè)均合格3次(間斷出現(xiàn))。在生物監(jiān)測(cè)不合格 的鍋次中,發(fā)現(xiàn)其中有6個(gè)鍋次,工藝檢測(cè)與化學(xué) 檢測(cè)結(jié)果均達(dá)到了滅菌規(guī)定的要求,但生物監(jiān)測(cè) 結(jié)果仍然為陽性,在這6個(gè)鍋次的12支生物指示 劑試管中,有6支在4h內(nèi)出現(xiàn)陽性,有3支在48 h后出現(xiàn)陽性,另有3支為陰性,即在同一鍋次的 2支試管中一支為陰性,另一支則為陽性,共有3 次。
3 原因分析
在正常情況下,如果工藝檢測(cè)與化學(xué)檢測(cè)符 合滅菌規(guī)定的要求,生物檢測(cè)就能達(dá)到滅菌效果, 出現(xiàn)上述這樣的陽性結(jié)果,尚不多見。生物指示 劑出現(xiàn)陽性的情況受諸多因素的影響,分析如下。
3.1 排除滅菌設(shè)備及操作問題
滅菌設(shè)備的質(zhì)量和故障、蒸汽質(zhì)量、殘留冷空 氣、物品包裝以及擺放不當(dāng)、在使用中不按照使用 說明操作,違背無菌操作原則等均可導(dǎo)致滅菌失 敗。然而在上述6個(gè)鍋次中,從整個(gè)滅菌過程到 包外指示膠帶、包內(nèi)指示膠帶卡、留點(diǎn)溫度和B- D試驗(yàn)結(jié)果,經(jīng)認(rèn)真排查與測(cè)試,排除了這些問題 的存在。自含式嗜熱脂肪桿菌芽胞生物指示劑的 設(shè)置與結(jié)構(gòu)本身,能避免被污染,使用時(shí)菌片進(jìn)入 培養(yǎng)基不與外界接觸,均在試管內(nèi)操作就能完成 因此操作中的污染也不存在。
3.2 排除放生物指示劑的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包不符合 要求
在大小符合規(guī)定要求的情況下,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試 包布不能做到使用1次,及時(shí)清洗1次時(shí),也可使 生物監(jiān)測(cè)結(jié)果陽性。這是因?yàn)闇y(cè)試包巾不及時(shí)清 洗或不按要求正規(guī)清洗,布巾經(jīng)多次使用后,布纖 維受高溫蒸汽作用,經(jīng)緯線密度發(fā)生變化,相互緊 壓,填塞了原有的孔隙,使其密度增強(qiáng),蒸汽不易 穿透,影響監(jiān)測(cè)效果[4];此情況開始未予重視,但 在每滅菌1次,包巾均徹底清洗1次,且工藝檢測(cè) 與化學(xué)檢測(cè)符合滅菌規(guī)定要求,仍然出現(xiàn)生物監(jiān) 測(cè)陽性,這說明,此陽性與標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包的因素也無 關(guān)。
3.3 排除生物指示劑的質(zhì)量問題
鎮(zhèn)江市疾病控制中心和該市的絕大部分醫(yī)療 單位均使用同樣的生物指示劑,均未發(fā)現(xiàn)問題。 測(cè)試期間還特請(qǐng)市疾病控制中心來幫助監(jiān)測(cè) 次,結(jié)果各項(xiàng)監(jiān)測(cè)包括生物監(jiān)測(cè)均符合要求。因 此,此陽性也可排除生物指示劑本身的影響因素。
3.4 生物指示劑的假陽性結(jié)果是因電熱恒溫水 箱的水被污染所致
逐一排查每一個(gè)環(huán)節(jié)后發(fā)現(xiàn),使用自含式生 物指示劑時(shí),在夾碎管內(nèi)安瓿的過程中,外層試管 會(huì)出現(xiàn)裂痕,對(duì)生物監(jiān)測(cè)的陽性結(jié)果有影響。為 此做了3項(xiàng)專門實(shí)驗(yàn)。①專取生物指示劑的培 養(yǎng)基放入2支清潔塑料試管內(nèi),經(jīng)高壓滅菌, 1支 試管內(nèi)加電熱恒溫水箱的水2 mL,另1支加5 ℃的水2 mL(自來水加熱而成)作對(duì)照,放56℃ 培養(yǎng)箱, 48 h后觀察結(jié)果,發(fā)現(xiàn)含水箱水的試管 出現(xiàn)陽性,而另1支對(duì)照管為陰性。②在含水箱 水的陽性試管與自含式生物指示劑陽性對(duì)照管 內(nèi),各取1 mL液體,嚴(yán)格按無菌操作置于血培養(yǎng) 基中,放在37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng),經(jīng)48 h后,觀察到2只平皿均發(fā)現(xiàn)有芽胞桿菌式菌落 生長,經(jīng)涂片染色,鏡下觀察均為革蘭陽性芽胞桿 菌。③將2支經(jīng)滅菌后用血管鉗鉗夾過的空塑 料試管(有與生物指示劑試管模擬裂痕),放入56 ℃電熱恒溫水溫箱中, 48 h后觀察,發(fā)現(xiàn)2支試 管均有水滲入,但量少均不足0.5 mL。以上3項(xiàng) 實(shí)驗(yàn)充分說明,電熱恒溫水溫箱的水被嗜熱脂肪 桿菌芽胞污染且在其內(nèi)生存,水溫箱的水滲入有 裂痕的生物指示劑試管,可造成生物指示劑的假 陽性結(jié)果。
因此可以斷定,在用血管鉗夾碎或者用手捏 碎自含式嗜熱脂肪桿菌芽胞生物指示劑管內(nèi)安瓿 時(shí),可致外層試管出現(xiàn)裂痕,將其放56℃電熱恒 溫水溫箱內(nèi)培養(yǎng)后,可使陽性的生物指示劑(如陽 性對(duì)照管)內(nèi)活的嗜熱脂肪桿菌芽胞,通過裂痕滲 入水溫箱的水中,并在其內(nèi)生存。事后調(diào)查還得 知,此溫箱內(nèi)的水使用以來從沒有更換過,也從未 消毒過,每次水少了僅是添加,嗜熱脂肪桿菌芽胞 污染了水溫箱內(nèi)的水,當(dāng)滅菌后的生物指示劑放 入水溫箱時(shí),如果試管有裂痕,水溫箱中的水就會(huì) 滲入,嗜熱脂肪桿菌芽胞隨之也侵入到滅菌后的 生物指示劑試管內(nèi),出現(xiàn)了生物指示劑的假陽性 結(jié)果。由于裂痕大小不一,污水滲入速度快慢不 一,快的在48 h內(nèi)出現(xiàn)陽性結(jié)果,慢的在48 h后 才出現(xiàn)。而生物指示劑的真陽性在48 h內(nèi)出現(xiàn), 一般不會(huì)在48 h后。在鉗夾試管時(shí),并不是每一 次都有裂痕,但只要有裂痕,就可能出現(xiàn)陽性;如 沒有裂痕,嗜熱脂肪桿菌芽胞就無法侵入,也就會(huì) 出現(xiàn)陰性結(jié)果。因此在同一個(gè)鍋次的同一個(gè)部位 的兩個(gè)試管,也就出現(xiàn)了一個(gè)陽性一個(gè)陰性的結(jié) 果。當(dāng)將水溫箱中的水更換,并將每一個(gè)生物指 示劑試管外包一層防水塑料再放入水溫箱內(nèi)培養(yǎng) 時(shí),滅菌后的生物指示劑就未再出現(xiàn)類似的陽性 結(jié)果。
參考文獻(xiàn)
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來源：中國化學(xué)試劑網(wǎng)
