甲狀腺素(thyroxine，或3，5，3’5’-tetraiodothyronine，T4)檢測采用競爭性時間分辨熒光免疫分析法。向二抗包被微孔板的反應(yīng)孔中加入待測血清、銪標記T4和鼠抗T4的單克隆抗體(單抗)一起溫育；樣本中T4和銪標記T4競爭性與鼠抗T4單抗上的結(jié)合位點結(jié)合，形成復合物；同時，鼠抗T4單抗和包被在微孔板上的二抗結(jié)合；經(jīng)溫育后洗板后，加入解離增強液將標記在復合物中的銪離子解離至溶液中，與增強液中的有關(guān)成分形成熒光整合物微囊，產(chǎn)生的熒光強度與樣品中的T4濃度成反比。
【試劑與器材】
購買成套的商品試劑盒，主要成分如下。
1．96孔微孔反應(yīng)板 已包被第二抗體。
2．T4標準品 由6瓶組成，分別含有0nmol／L、20nmol／L、50nmol／L、100nmol／L、150nmol／L、300nmol/LT4標準品。
3．抗T4單克隆抗體 1瓶(0．75m1)。
4．銪標記T4 1瓶(0．75 m1)。
5．濃縮洗液(25×) l瓶(40m1)。
6．緩沖溶液 1瓶(30m1)。
7．增強液 l瓶(50m1)。
8．儀器 時間分辨熒光免疫分析儀。
【操作步驟】
1．試劑準備
(1)洗滌液：40ml濃縮洗液加960ml蒸溜水混合(pH 7．8)。
(2)銪標記T4：使用前1小時內(nèi)配制，每條反應(yīng)板需30μl銪標記T4加3ml緩沖液。
(3)抗T4單克隆抗體工作液：30μ1抗T4單抗加3ml緩沖液。
2．洗板1次，拍干。
3．吸取25μ1 T4標準品或待測血清按順序加入微孔反應(yīng)板的小孔中。
4．每孔加200μ1已稀釋的銪標記T4和抗T4單抗工作液。用振蕩器振蕩90分鐘，注意不要超過2小時。洗板4次，拍干。
5．每孔加入增強液200μl。加樣過程中，盡量避免加樣頭碰到孔中的試劑，以免污染。微孔反應(yīng)條在振蕩儀上振蕩5分鐘，用時間分辨熒光檢測儀檢測。
【結(jié)果計算】
以T4標準品的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標)，熒光強度為縱坐標(普通坐標)，在半對數(shù)坐標紙上繪制標準曲線，根據(jù)樣品的熒光強度即可查出相應(yīng)的T4濃度。此步驟通常以時間分辨熒光測定儀按設(shè)定模式直接打印，報告結(jié)果。
【參考區(qū)間】
成人：69．0～141．0nmol/L。
【臨床意義】
1．甲亢、T3毒血癥、大量服用甲狀腺素、慢性甲狀腺炎急性惡化期、甲狀腺結(jié)合球蛋白結(jié)合力增高癥等患者血清T4值顯著升高。
2．原發(fā)或繼發(fā)性甲狀腺功能減退，如黏液性水腫、呆小癥，以及服用抗甲狀腺藥物、甲狀腺結(jié)合球蛋白結(jié)合力降低、腎病綜合征、重癥肝病患者及服用某些藥物(如苯妥英鈉、柳酸制劑等)時血清中T4值顯著降低。
【注意事項】
1．認真閱讀說明書，嚴格按說明書操作。不同批號的試劑，過期的試劑不可使用。
2．實驗室環(huán)境干凈無塵，對于試驗成功有決定性的意義。
3．每批檢測時最好用復孔做標準曲線。
4．試劑和檢樣使用前應(yīng)恢復至室溫(18～25℃)。
5．洗板機應(yīng)定期進行校正，保證管道通暢。洗滌時，確認微孔注滿洗液；洗滌完成后保證微孔殘留液不超過5μl；并將微孔板倒扣于無塵吸水紙上拍干。
6．加增強液及銪標記物時，請使用專用吸頭，以避免污染。加增強液及中和抗原時，吸頭應(yīng)懸空，避免接觸小孔邊緣及其中的試劑。
7．使用干凈一次性容器配制銪標記物，不同試驗的銪標記物不可混用。避免銪標記稀釋液進入銪標記
