血清中各種蛋白質(zhì)的等電點(pI)大都低于8．6，在pH 8．6的緩沖液中，電離成負(fù)離子，在電場中向正極移動。因各種蛋白質(zhì)pI不同，在同一pH下帶電荷量有差異，同時各蛋白質(zhì)的分子大小與分子形狀也不相同，因此在同一電場中泳動速度也不同。帶電荷多，分子量小者，泳動較快；反之則較慢。
醋酸纖維素薄膜電泳可將血清蛋白分離為5條區(qū)帶，從正極端起依次為白蛋白、α1-球 蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白及γ-球蛋白。由于染色時染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合與蛋白質(zhì)的量成正比，因此將各蛋白區(qū)帶剪下，經(jīng)脫色、比色或經(jīng)透明處理后直接用光密度計掃描，即可計算出血清各蛋白組分的相對百分?jǐn)?shù)。如同時測定出血清總蛋白濃度，還可計算出各蛋白組分的絕對濃度。
【試劑與器材】
1．巴比妥緩沖液(pH 8．6，離子強(qiáng)度0．06)稱取巴比妥鈉12．36g、巴比妥2．21g，于500mL蒸餾水中加熱溶解，冷卻至室溫后，用蒸餾水定容至1L。
2．染色液
(1)麗春紅S染色液：稱取麗春紅S 0．4g、三氯醋酸6g，溶于蒸餾水中并定容至100mL。
(2)氨基黑10B染色液：①第一種配方(推薦配方)：稱取氨基黑10B 0．1g，溶于20mL無水乙醇中，加冰醋酸5mL，甘油0．5mL；另取磺柳酸2．5g溶于少量蒸餾水中，加入前液，混和搖勻，再以蒸餾水補(bǔ)足至100mL。②第二種配方：稱取氨基黑10B 0．5g溶解于50mL甲醇中，加入冰醋酸10mL和蒸餾水40mL，混合即成。
3．漂洗液
(1)3％(V/V)醋酸溶液，適用于麗春紅S染色的漂洗。
(2)甲醇45mL，冰醋酸5mL，蒸餾水50mL，混勻。適用于氨基黑10B染色的漂洗。
4．透明液
(1)液體石蠟或氫萘的潤濕透明法，均十分方便。
(2)冰醋酸：95％乙醇=2．7：7．5的混合液。
(3)N-甲基-2-吡咯烷酮．檸檬酸(3．03mol/L N-甲基-2-吡咯烷酮，0．15mol/L檸檬酸)：稱取檸檬酸15g溶于150mL水中，加入N-甲基-2-吡咯烷酮150mL，混勻，加蒸餾水至500mL。
5．洗脫液
(1)0．1mol/L NaOH溶液，適用于麗春紅S染色的洗脫。
(2)0．4mo1/L NaOH溶液，適用于氨基黑10B染色的洗脫。
6．電泳儀 電子管或晶體管整流的直流電源，電壓0~600V，電流0~300mA。
7．電泳槽 鉑(白金)絲電極的水平電泳槽。
8．加樣器 血紅蛋白管和0．2cm×1．5cm有機(jī)玻璃片或X線膠片或特制電泳加樣器。
9．染色皿、漂洗皿、鑷子。
10．光密度計、721分光光度計。
11．醋酸纖維素薄膜 規(guī)格2cm×8cm(比色法)，6cm×8cm(掃描法)。
【操作步驟】
1．準(zhǔn)備
(1)電泳槽準(zhǔn)備：將電泳槽置于水平平臺上，兩側(cè)注入等量的巴比妥緩沖液，使其在同一水平面，液面與支架距離2～2．5cm，支架寬度調(diào)節(jié)在5．5~6cm，用三層濾紙或雙層紗布搭橋。
(2)CAM的準(zhǔn)備：選擇厚薄一致、透水性能好的CAM，在無光澤面一端1．5cm處用鉛筆輕畫一橫線作點樣標(biāo)記。然后將CAM無光澤面朝下，漂浮于盛有巴比妥緩沖液的平皿中，使之自然浸濕下沉，待充分浸透后(約20分鐘)用鑷子取出。
