LINK鏈接豬肉是否含瘦肉精的快速判斷方法
看該豬肉的脂肪(豬油)，如該豬肉在皮下就是瘦肉或僅有少量脂肪，則該豬肉就可能含有“瘦肉精(CLB)”。
含有“瘦肉精”的瘦肉外觀特別鮮紅，纖維比較疏松，切成二三指寬的豬肉比較軟，不能立于案，瘦肉與脂肪間有黃色液體流出，脂肪特別薄。而一般健康的瘦豬肉是淡紅色，肉質(zhì)彈性好，瘦肉與脂肪間沒有任何液體流出。
購買時一定要看清該豬肉是否蓋有檢疫印章和檢疫合格證明。
一、樣品快速檢測方法
1.膠體金檢測卡法
(1)特點(diǎn)
①操作簡單、檢測速度快，尿樣檢測時間約5min，組織約10min。
②無需其他儀器設(shè)備。
③樣品量需求少。
④適用于大量樣本的快速步篩。
⑤結(jié)果判斷簡單明了。
(2)判斷結(jié)果
①陰性:C線條顯色，T線條肉眼可見，無論顏色深淺均判為陰性。
②陽性:C線條顯色，T線條不顯色，判為陽性。
③無效:C線條不顯色，無論T線條是否顯色，該試紙均判為無效。
(3)檢測對象
豬尿液、組織；豬飼料；豬肉制品。
(4)適用單位
生殖養(yǎng)殖場、屠宰場，農(nóng)業(yè)、貿(mào)易等主管部門。
2.酶聯(lián)免疫(ELISA)法
(1)檢測原理
測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。微孔板包被有針對克倫特羅IgG的包被抗體?？藗愄亓_抗體被加入，經(jīng)過孵育及洗滌步驟后，加入競爭性酶標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)或試樣溶液?？藗愄亓_與競爭性酶標(biāo)記物競爭克倫特羅抗體，沒有與抗體連接的克倫特羅酶標(biāo)記物在洗滌步驟中除去。將底物(過氧化尿素)和發(fā)色劑(四甲基聯(lián)苯胺)加入孔中孵育，結(jié)合的標(biāo)記酶將無色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物。加入反應(yīng)停止液后使顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450nm處測量吸光度值，吸光度壁紙與克倫特羅濃度的自然對數(shù)成反比。
(2)試劑
磷酸二氫鈉、高氯酸、異丙醇、乙酸乙酯、0.1mol/L高氯酸溶液、1mol/L氫氧化鈉溶液、pH=6的0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖溶液、異丙醇+乙酸乙酯(40+60)、針孔式微孔過濾膜(0.45μm，水相)、克倫特羅酶聯(lián)免疫試劑盒、96孔板(12調(diào)×8孔)包被有針對克倫特羅IgG的包被抗體、克倫特羅系列標(biāo)準(zhǔn)液(最少5倍比稀釋濃度水平，外加1個空白、過氧化物酶標(biāo)記物(濃縮液)、克倫特羅抗體(濃縮液)、酶底物(過氧化尿素)、發(fā)色劑(四甲基聯(lián)苯胺)、反應(yīng)停止液(1mol/L硫酸)、緩沖液(酶標(biāo)記物及抗體濃縮液稀釋用)。
(3)儀器
超聲波清洗器、磨口玻璃離心管:11.5cm(長)×3.5cm(內(nèi)徑)，具塞、酸度計、離心機(jī)、震蕩機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、渦旋式混合器、勻漿器、酶標(biāo)儀(配備450nm濾光片)、微量移液器:單道20μL、50μL、100μL和多道(50～250)μL可調(diào)。
(4)試樣測定
①肌肉、肝臟及腎臟試樣
稱取肌肉、肝臟或腎臟試樣10g(精確到0.01g)，用20mL0.1mol/L高氯酸溶液均漿，置于膜口玻璃離心管中；然后置于超聲波清洗器中超聲20min，取出置于80℃水浴中加熱30min。取出冷卻后離心(4500r/min)15min。傾出上清液，沉淀用5mL0.1mol/L高氯酸溶液洗滌，再離心，將兩次上清液合并。用1mol/L氫氧化鈉溶液pH值調(diào)至9.5±0.1，若有沉淀產(chǎn)生，再離心10min將上清液轉(zhuǎn)移至磨口玻璃離心管中，加入8g氯化鈉，混勻，加入25mL異丙醇+乙酸乙酯(40+60)，置于振蕩器上振蕩提取20min。提取完畢，放置5min(若有乳化層稍離心一下)。用吸管小心將上層有機(jī)相移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，用20mL異丙醇+乙酸乙酯(40+60)再重復(fù)萃取一次，合并有機(jī)相，于60℃在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至近干。用1mL0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖(pH=6.0)充分溶解殘留物，經(jīng)針筒式微孔過濾膜過濾，洗滌3次后完全轉(zhuǎn)移至5mL玻璃離心管中，并用0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH=6.0)定容至刻度。
②尿樣試樣
若尿液渾濁先離心(3000r/min)10min，將上清液適當(dāng)稀釋后上酶標(biāo)板進(jìn)行酶聯(lián)免疫法篩選試驗。
③血液試樣
將血清或血漿離心(3000r/min)10min，將上清液適當(dāng)稀釋后上酶標(biāo)板進(jìn)行酶聯(lián)免疫法篩選試驗。
(5)檢測步驟
①將標(biāo)準(zhǔn)試樣(至少按雙平行實驗計算)所用數(shù)量的孔條插入微孔架，記錄標(biāo)準(zhǔn)和試樣的位置。
②加入100μL稀釋后的抗體溶液到每個微孔中,充分混合并在溫室孵育15min。
③倒入孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打(每行拍打3次)，以保證完全除去孔中的液體。將250μL蒸餾水充入孔中，再次倒入孔中液體，再重復(fù)操作兩遍以上。
④加入20μL的標(biāo)準(zhǔn)或處理好的試樣到各自的微孔中。標(biāo)準(zhǔn)和試樣至少做兩個平行試驗。
⑤加入100μL稀釋的酶標(biāo)記物，溫室孵育30min。
⑥加入50μL酶底物和50μL發(fā)色試劑到微孔中，充分混合并在溫室暗處孵育15min。
⑦加入100μL反應(yīng)停止液到微孔中,混合好盡快在450nm波長處測量吸光度值。
(6)結(jié)果計算
用所獲得的標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液吸光度值與空白溶液的比值計算。
相對吸光度值(%)=B/B0×100%
式中:B——標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度；B0——空白(濃度為0的標(biāo)準(zhǔn)溶液)的吸光度。
將計算的相對吸光度值(%)對應(yīng)克倫特羅濃度(ng/L)的自然對數(shù)作為坐標(biāo)系統(tǒng)曲線圖，校正曲線在(0.004～0.054)ng(200ng/L～2000ng/L)范圍內(nèi)呈線性，對應(yīng)的試樣濃度可通過校正曲線算出。
X=(A×f)/(m×1000)
式中:X——試樣中克倫特羅的含量，μg/kg；A——試樣的相對吸光度值(%)對應(yīng)的克倫特羅含量，ng/L；f——試樣稀釋倍數(shù)；m——試樣的取樣量，g。
計算結(jié)果精確到小數(shù)點(diǎn)后兩位。
二、其他方法
目前，檢測瘦肉精的常用方法有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(CE)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)、氣相色譜-傅立葉紅外聯(lián)用法(GC-FTIR)、薄層色譜法(TLC)。而我國結(jié)合自己的實際情況，2001年農(nóng)業(yè)部首先組織制定了飼料中鹽酸克倫特羅的測定標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)選擇確定了兩種測定方法:高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)。
1.高效液相色譜法(HPLC)
HPLC法適合測定熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性的β-激動劑及其代謝產(chǎn)物，而且HPLC法可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)和質(zhì)譜(MS)等系統(tǒng)聯(lián)用，容易實現(xiàn)分析過程的自動化。目前，我國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為(1～15)ng/g，其優(yōu)點(diǎn)是專屬性好、選擇性強(qiáng)、檢測精確度較高，而且假陽性率低；缺點(diǎn)是樣品處理時間長，檢測過程繁瑣、難以操作，需貴重儀器，在實際應(yīng)用中受到一定限制。
2.氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)
GC-MS法的優(yōu)點(diǎn)是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機(jī)結(jié)合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析，而且具有更高的檢測極限。另外，GC-MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低。因此，我國將GC-MS法定為檢測CLB的確證性方法(NY/T468-2001)。
3.液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)
參見SN/T1924-2007進(jìn)出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于動物源性食品肌肉和內(nèi)臟中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測。試樣中的藥物殘留采用pH值為5.2的乙酸銨緩沖液提取，同時加入β-鹽酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶進(jìn)行酶解后，提取液經(jīng)C18和SCX雙SPE柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜進(jìn)行測定，內(nèi)標(biāo)法定量。
三、展望
根據(jù)目前國內(nèi)外檢測CLB各種辦法的進(jìn)展情況以及CLB濫用及殘留的嚴(yán)峻性，建立多種克服上述各種檢測方法缺點(diǎn)的簡便、快速、精確、可實現(xiàn)在線檢測的CLB技術(shù)勢在必行。滴金免疫技術(shù)(DIGFA)和生物傳感技術(shù)(biosensor，BS)是兩種快速、高效的殘留物分析技術(shù)。其中，DIGFA技術(shù)已成功運(yùn)用于早孕診斷、弓形蟲病診斷、血吸蟲病診斷等，靈敏度及準(zhǔn)確度均很理想。
對于生物傳感器技術(shù)，其原理為當(dāng)分子識別部分與被識別物質(zhì)相接觸時，可發(fā)生化學(xué)變化、熱變化、光變化以及直接誘導(dǎo)電信號，而后利用電學(xué)測量方法進(jìn)行檢測、控制和顯示輸出。國外已有用生物傳感器技術(shù)檢測CLB殘留的資料報道，其優(yōu)點(diǎn)是假陽性率低、高效、方便?？傊_發(fā)研制出高效、方便、迅速的DIGFA試紙條和生物傳感器是檢測CLB殘留較為理想的方法和途徑，也是今后的發(fā)展趨勢。
