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UV法測定鹽酸洛貝林注射液含量的不確定度分析

• 發(fā)布日期：2016/9/19 14:57:31 閱讀次數(shù)：1520

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  筆者依據(jù)JJF1059-1999《測量不確定度評定與表示》、《化學(xué)分析中不確定度的評估指南》、《中國藥典》2005年版二部，對紫外分光光度法測定鹽酸洛貝林注射液含量的不確定度進(jìn)行了分析，以期找出影響因素最大的分量，從而對檢測進(jìn)行優(yōu)化。

  
  

  一、實(shí)驗(yàn)部分

  
  

  1.儀器與試劑

  UV340紫外分光光度計(jì)，美國熱電公司。供試品:鹽酸洛貝林注射液，上海禾豐制藥有限公司，規(guī)格1mL:3mg，批號080702。

  2.測定方法

  供試品溶液的制備:精密量取供試品溶液2mL置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取15mL置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成每1mL中約含10μg的溶液，搖勻即得。

  取供試品溶液，置于厚度為1cm的石英吸收池中，用UV340紫外分光光度計(jì)測定其在249nm的波長處的吸光度，其平均值為0.346，按鹽酸洛貝林(C₂₂H₂₇NO₂·HCl)的吸收系數(shù)()為375計(jì)算，得鹽酸洛貝林注射液的含量為標(biāo)示量的102.5%。

  
  

  二、不確定度評估

  
  

  1.數(shù)學(xué)模型

  鹽酸洛貝林注射液中含鹽酸洛貝林(C₂₂H₂₇NO₂·HCl)的標(biāo)示百分含量為

   

  
  

   

  式中:W——鹽酸洛貝林注射液的標(biāo)示百分含量，%；A——供試品溶液的吸光度；——鹽酸洛貝林的吸收系數(shù)；L——液層厚度，cm；C_標(biāo)——鹽酸洛貝林注射液的標(biāo)示濃度，mg·mL^-1；——供試品溶液的稀釋體積，V；1000——從g到mg的換算系數(shù)；100——從100mL到mL的換算系數(shù)。

  2.不確定度來源

   

  (1)是《中國藥典》規(guī)定的吸收系數(shù)，是該物質(zhì)的物理常數(shù)，為給定值，本次測量暫不考慮其不確定度。

   

  (2)L亦即測量過程中使用的吸收池的厚度(1cm)，吸收池為供應(yīng)商提供的合格產(chǎn)品，一般認(rèn)為其質(zhì)量符合規(guī)定。并且每次測量之前均對配對使用的吸收池進(jìn)行校準(zhǔn)，測量過程中均使用參比光路，故在此未考慮其不確定度。

   

  (3)標(biāo)示濃度C_標(biāo)即其規(guī)格(1mL:3mg)，為鹽酸洛貝林注射液含量的名義濃度，其有效位數(shù)可視為無限多位，沒有欠準(zhǔn)數(shù)字，不產(chǎn)生不確定度。

   

  (4)吸光度A引起的不確定度u(A)

   ①測量重復(fù)性引起的不確定度u(A₁)

   

  對10份供試品溶液進(jìn)行紫外分光光度法測定，每份測定3次，得到30個(gè)吸光度數(shù)據(jù)，其平均值為0.346，是隨機(jī)測量，屬A類評定，計(jì)算各次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差s，則

  u(A₁)=1.39×10^-3

   

  ②紫外分光光度計(jì)讀數(shù)準(zhǔn)確度的不確定度u(A₂)

  由UV340紫外分光光度計(jì)的檢定證書可知:測量結(jié)果的準(zhǔn)確度的相對偏差為0.39%，其引用的不確定度假定為矩形分布()，則其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

  

   

   ③紫外分光光度計(jì)測量穩(wěn)定性的不確定度u(A₃)

   

  由UV340紫外分光光度計(jì)的檢定證書可知:測量結(jié)果的穩(wěn)定性為0.06%，其引用的不確定度假定為矩形分布()，則其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

  

   

  由以上3種分量合成得吸光度A的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

  

  吸光度A的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

  u_rel(A)=u(A)/A=2.67×10^-3/0.346=7.72×10^-3

  (5)供試品溶液稀釋引起的不確定度u(V)

   

   ①2mL單標(biāo)線吸管的不確定度u(V₁)

   

  2mL單標(biāo)線吸管經(jīng)檢定為A級，容量允差為±0.010mL，設(shè)為三角形分布()，屬B類評定，則

  

   

  u_rel(V₁)=u(V₁)/V₁=4.08×10^-3/2=2.04×10^-3

   

  ②15mL單標(biāo)線吸管的不確定度u(V₂)

  15mL單標(biāo)線吸管經(jīng)檢定為A級，容量允差為 ±0.025mL，設(shè)為三角形分布()，屬B類評定，則

   

  

   

  u_rel(V₂)=u(V₂)/V₂=0.0102/15=6.80×10^-4

   

   ③100mL單標(biāo)線容量瓶的不確定度u(V₃)、u(V₄)

  a.校準(zhǔn):100mL容量瓶經(jīng)檢定為A級，20℃時(shí)的體積為(100±0.10)mL，容量允差為±0.10mL，設(shè)為三角形分布()，屬B類評定，則

  

  b.重復(fù)性:100mL容量瓶充滿10次并稱重，得出標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.02mL，可以直接用作標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

  u₂=s=0.02mL

  c.溫度:該容量瓶已在20℃時(shí)校準(zhǔn)，而實(shí)驗(yàn)室溫度在±5℃之間變動。水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10^-4℃^-1，由此產(chǎn)生的體積變化為±(100×5×2.1×10^-4)=±0.105mL，假設(shè)溫度變化是矩形分布()，屬B類評定，則

  

  三種分量合成得到容量瓶體積的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

  

  u_rel(V₃)=u(V₃)/V₃=u_rel(V₄)=u(V₄)/V₄=0.0757/100=7.57×10^-4

   

  3.不確定度分量匯總

   

  通過以上量化分析，得出表1。

  
  

  

  
  

  <CTSM>表1數(shù)值和不確定度</CTSM>

   

  4.合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

   

  u_c(w)=W×

  5.擴(kuò)展不確定度

   

  假定測量結(jié)果符合正態(tài)分布，當(dāng)置信概率為95%時(shí)，選擇包含因子k=2，則擴(kuò)展不確定度為

  U(w)=k×u_c(w)=2×0.83%=1.7%

   

  6.不確定度報(bào)告

   

  紫外分光光度法測定鹽酸洛貝林注射液的含量，含鹽酸洛貝林(C₂₂H₂₇NO₂·HCl)為標(biāo)示量的102.5%±1.7%，k=2。

  
  

  三、討論

  
  

  根據(jù)小分量不確定度不足最大分量不確定度的1/3時(shí)，小分量不確定度可以忽略不計(jì)的原則，由表1的評定結(jié)果可以看出，吸光度A引起的不確定度分量對含量測定的影響最大，而其他因素對合成不確定度的貢獻(xiàn)均不顯著。吸光度A引起的不確定度是由多個(gè)分量疊加得到的，而單個(gè)分量的大小由上述分析可以看出，主要取決于吸光度的測量重復(fù)性以及紫外分光光度計(jì)讀數(shù)準(zhǔn)確度的不確定度。因此，在用本方法進(jìn)行鹽酸洛貝林注射液含量測定時(shí)，可通過規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作、定期對紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢定及期間核查等途徑，降低不確定度值的大小。

  在稀釋供試品溶液時(shí)所用的容量器具均為A級量器，故已不能通過提高量器的精密度改善結(jié)果，但可以通過重新設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟，盡可能減少稀釋轉(zhuǎn)移的次數(shù)，減少u_rel(V_i)分量的個(gè)數(shù)，減少疊加對結(jié)果的影響。另外，由表1可以看出，2mL單標(biāo)線吸管引起的不確定度分量較其他體積分量大得多，故應(yīng)盡量避免使用2mL及2mL以下體積的量器，以降低測量不確定度，提高測定結(jié)果的可靠性。

   

  在藥品檢驗(yàn)過程中，可先對其檢驗(yàn)方法的不確定度進(jìn)行評估，找出影響因素較大的分量，以便在檢驗(yàn)中充分注意，采取適當(dāng)途徑，降低不確定度，提高藥品檢驗(yàn)質(zhì)量。

  
  

  注：華南標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)-國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采購平臺