1．原理
樣品經(jīng)處理后，直接進入高效液相色譜儀分析，以保留時間定性，峰面積定量。
2．試劑
乙腈(HPLC級)、正己烷、氯化鈉、超純水。
3．儀器
高效液相色譜儀，紫外檢測器，N2000色譜數(shù)據(jù)工作站，超聲波清洗器，渦旋振蕩儀，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
4．測定方法
(1)樣品處理稱取辣椒樣品5g置于150mL三角瓶中，加入50mL乙腈，充分攪拌均勻，超聲30min，再加入10g氯化鈉，攪拌均勻后離心(4 000r／min，lOmin)。取一
半上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，殘渣加入2mL流動相和5mL正己烷，渦旋混合后離心(4 000，／min，5min)，棄去上層正己烷層，下層定容至3mL，過0．45Ixm的濾膜上機檢測。
(2)高效液相色譜參考條件
①蘇丹紅1號：
a．色譜柱：Waters 5C18一Ms一Ⅱ柱（5um，4．6mm×250mm)，室溫。
b．流動相：乙腈一水(90／lO，體積比)，流速1．OmL／min，使用前需用超聲波脫氣處理。
c．檢測波長：478nm。
②蘇丹紅2、3、4號：采用梯度洗脫和變波長的方法
a．色譜柱：Venuses XBP—C18柱(5um，4．6mm×150mm)。
b．流動相：溶劑A(0．1％甲酸水溶液／乙腈：85／15)，溶劑B(O．1％甲酸的乙腈溶液／丙酮=80／20)。
c．梯度洗脫：流速1mL／min。
d．檢測波長：520nm。
蘇丹紅1、2、3、4號同時進樣，12min后自動切換波長。
(3)測定點進樣品提取液20斗L。并同時進入蘇丹紅1號品的標準溶液，與標準比較。
