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第7期精選論文之四：中空纖維膜微萃取/超高效液相色譜法檢測大腸桿菌中氨基酸的研究
大腸桿菌是與人類日常生活關(guān)系非常密切的一類細菌，其主要代謝物有氨基酸、磷酸糖、有機酸、核苷等極性物質(zhì)，其中氨基酸作為構(gòu)成生物體蛋白最基本的物質(zhì)，占代謝物總含量的比例較高，因此準(zhǔn)確測定大腸桿菌中氨基酸的含量具有重要意義。
目前，生化樣品中氨基酸的前處理方法主要有離心過濾、分散液液微萃取、選擇性沉淀、中空纖維膜液相微萃取等。其中，中空纖維膜液相微萃取的樣品純化能力好、富集倍數(shù)高、有機溶劑用量少，且中空纖維膜一次性使用，避免了交叉污染。氨基酸的分析方法主要有高效液相色譜法、陰離子交換色譜法、毛細管電泳法、氨基酸分析儀測定法等，與之相聯(lián)的檢測方法有質(zhì)譜檢測、電化學(xué)檢測、紫外檢測、激光誘導(dǎo)熒光檢測等。
華東師范大學(xué)王清江教授建立了三相中空纖維膜微萃取/超高效液相色譜（HF-LPME/UHPLC）方法，用于大腸桿菌中8種氨基酸的測定。設(shè)計了三相中空纖維膜微萃取系統(tǒng)，優(yōu)化了HF-LPME最佳萃取條件：液膜為正辛醇，接收相NaOH的濃度為0.30mol/L，給出相樣品溶液中鹽酸濃度為5.0mmol/L，NaCl質(zhì)量濃度為200g/L，萃取溫度為25℃，攪拌速度為500r/min，萃取時間為4h。8種氨基酸經(jīng)衍生并萃取后進行色譜分析，在5min內(nèi)達基線分離，其峰面積與濃度在0.20～4.9×103μmol/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r2均大于0.999，富集倍數(shù)為110～290倍，檢出限為0.08～0.35μmol/L。在10μmol/L加標(biāo)水平下，大腸桿菌樣品的平均回收率為88.7%～103.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）為3.2%～4.3%。該方法靈敏度高、重復(fù)性好，可用于細菌中氨基酸的檢測。
該研究獲得了國家自然科學(xué)基金項目（21575042）資助，相關(guān)成果發(fā)表于《分析測試學(xué)報》2018年7期第790～795頁。
doi：10.3969/j.issn.1004-4957.2018.07.006
【引用本文】：李儀，趙雙麗，張炎，何品剛，王清江.中空纖維膜微萃取/超高效液相色譜法檢測大腸桿菌中氨基酸的研究[J].分析測試學(xué)報,2018, 37(7):790-795.
【Cite this article】：LI Yi,ZHAO Shuang-li,ZHAN Yan,HE Pin-gang，WANG Qing-jiang.Determination of Amino Acids in Escherichia Coli.by Ultrahigh Performance Liquid Chromatography Combined with Hollow Fiber Membrane Microextraction[J].Journal of Instrumental Analysis,2018, 37(7):790-795.
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