什么是PCR實(shí)驗(yàn)的靈敏度?
靈敏度指的是PCR擴(kuò)增反應(yīng)能夠檢測到目的基因的最小值。研究結(jié)果表明，影響PCR擴(kuò)增效率的因素，如模板的復(fù)雜程度與完整性、引物的純度及其與模板的結(jié)合效率、反應(yīng)溫度、DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性與擴(kuò)增性能、反應(yīng)緩沖液的離子組成（主要指陽離子）、反應(yīng)優(yōu)化劑等等，都決定了PCR實(shí)驗(yàn)的檢測靈敏度。在最佳的擴(kuò)增條件下，常規(guī)PCR反應(yīng)能夠檢測到的pg(10-12g)數(shù)量級的目的基因。對于一個特定的目的基因而言，模板與引物通常都是已經(jīng)限定好的因素。因此，選擇什么樣的PCR反應(yīng)體系（包括DNA聚合酶與反應(yīng)緩沖液等）就是研究者提高PCR實(shí)驗(yàn)靈敏度的關(guān)鍵因素了。
與實(shí)驗(yàn)室自配的PCR擴(kuò)增體系相比，東盛的Taq Mix對反應(yīng)緩沖液中的成分進(jìn)行優(yōu)化，并加入了適當(dāng)比例的反應(yīng)增強(qiáng)劑（PCR Enhancer），提高了DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性，顯著降低模板的二級結(jié)構(gòu)對PCR擴(kuò)增性能的影響，使得DNA聚合酶處于最適活性狀態(tài)，從而獲得了比自配體系更高的檢測靈敏度。即時反應(yīng)體系中只有幾個目的基因的拷貝，也能輕松檢測。
什么是PCR實(shí)驗(yàn)的特異性？
特異性指的是在PCR擴(kuò)增過程中，專一性地?cái)U(kuò)增目的片段而非其他片段的性能。在PCR實(shí)驗(yàn)本身的靈敏度很高，且實(shí)驗(yàn)條件未充分優(yōu)化的情況，通常會在目的片段出現(xiàn)的同時伴隨有其他的雜帶，即發(fā)生非特異性擴(kuò)增的現(xiàn)象。模板、引物性質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)條件的控制等均會影響PCR擴(kuò)增的特異性。近年來的研究結(jié)果表明，緩沖液的品質(zhì)（如離子種類與組成，反應(yīng)優(yōu)化劑等）對保證PCR的特異性擴(kuò)增起著不可忽視的作用。一般的緩沖液中調(diào)節(jié)氫鍵作用的鹽只有KCl，而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過反應(yīng)優(yōu)化劑以及KCl/(NH4)SO4鹽離子體系的平衡調(diào)節(jié)，顯著提高了PCR擴(kuò)增的特異性，降低背景。
PCR實(shí)驗(yàn)的靈敏度與特異性是一對此長彼消的特性，這也決定我們實(shí)驗(yàn)體系調(diào)節(jié)實(shí)際就是找到適合實(shí)驗(yàn)的靈敏度與特異性的平衡點(diǎn)。由于PCR體系中的眾多成分，使得組合較多，篩選工作繁雜。東盛基于靈敏度與特異性分別設(shè)計(jì)了PCR Mix和HS Taq Mix，幫您確定大的平衡點(diǎn)，如果您需要更細(xì)致的平衡點(diǎn)，請選擇相應(yīng)的Mix Kit系列進(jìn)行微調(diào)。
來源：試劑儀器網(wǎng)
