引言
隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大和集約化養(yǎng)殖的發(fā)展，造成養(yǎng)殖環(huán)境的日益惡化，近年來(lái)水產(chǎn)養(yǎng)殖病害發(fā)病率越來(lái)越高，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展造成嚴(yán)重的威脅。魚(yú)類細(xì)菌性疾病由于其發(fā)病快、感染率高的特點(diǎn)，是養(yǎng)殖魚(yú)類中最為常見(jiàn)的一類疾病。因此，魚(yú)類細(xì)菌性疾病的研究一直是魚(yú)病學(xué)主要研究領(lǐng)域之一。
傳統(tǒng)防治魚(yú)類細(xì)菌性疾病的手段主要是使用抗菌化學(xué)藥物治療。但是長(zhǎng)期使用抗菌化學(xué)藥物也給養(yǎng)殖環(huán)境和水產(chǎn)品帶來(lái)重大安全隱患。我國(guó)結(jié)合實(shí)際，采用中藥進(jìn)行防治魚(yú)類細(xì)菌性疾病的研究。中藥所含化學(xué)成分很復(fù)雜，通常包括糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、揮發(fā)油、生物堿、甙類、油質(zhì)、蠟、酶、色素和維生素等。因此，在研究和利用天然產(chǎn)物的過(guò)程中，研究有效成分，首先必須研究天然產(chǎn)物活性物質(zhì)的化學(xué)成分及其提取分離。
本實(shí)驗(yàn)采用超聲、索式、旋蒸三種方法分離提取中藥黃芩，通過(guò)瓊脂平板稀釋法測(cè)定粗提物對(duì)養(yǎng)殖鰻魚(yú)9株主要病原菌的最低抑菌濃度（MIC），為中藥應(yīng)用于治療水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性疾病提供理論依據(jù)和參考。
1 材料與方法
1.1 三種提取法抑菌效果比較
1.1.1 材料
中草藥：黃芩。
供試菌株：從養(yǎng)殖場(chǎng)染病的日本鰻鱺分離9株菌株，由本實(shí)驗(yàn)室保存，弧菌（3株）：FJ-1、FJ-2、FJ-3；遲鈍愛(ài)德華氏菌（2株）：G1-2、Sh2-2；氣單胞菌（4株）：B18、F3-4、Sh2-13、S4-4。
主要試劑：MH培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、NaOH溶液、H2SO4溶液、無(wú)水乙醇。
1.1.2 方法
1.1.2.1 中藥處理方法
中藥的粉碎：將所選中藥用中藥粉碎機(jī)粉碎，然后用200目的篩網(wǎng)過(guò)濾，收集過(guò)篩后的中藥備用。
中藥索氏提?。悍Q取所選中藥15克，用150mL70%乙醇浸泡30min，然后用索氏提取儀提取，提取條件為熱量級(jí)12，提取時(shí)間60min，淋洗條件為熱量級(jí)12，淋洗時(shí)間為10min，提取后的藥液放于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
中藥超聲提?。悍Q取所選中藥15克，用150mL70%乙醇溶液浸泡30min,然后在超聲提取儀下提取60min,條件為變幅桿6mm,超聲功率720W，溫度50℃，超聲3s，間歇5s,提取后離心取上清液，放于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
中藥旋蒸提?。悍Q取黃芩5克，用50ml 70％ 乙醇溶液旋蒸1h，取上清液過(guò)濾，4℃冰箱保存?zhèn)溆?/span>
中藥旋蒸提?。ㄋ幔悍Q取黃芩5克，用50ml 蒸餾水旋蒸1h，取上清液過(guò)濾，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
1.1.2.2 菌懸液制備
從保種斜面上挑取菌苔劃線接種MH瓊脂平板，置于28℃培養(yǎng)24h；挑取單個(gè)菌落劃線至新鮮斜面上，28℃培養(yǎng)24h后，用無(wú)菌生理鹽水將菌體沖洗下來(lái)，將菌液濃度稀釋至107CFU/mL，既可作為藥敏試驗(yàn)接種的菌懸液。
1.1.2.3 藥敏試驗(yàn)
采用瓊脂稀釋法，將中藥超微粉加到MHB培養(yǎng)基中，配制出不同濃度的藥敏培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)121℃ 20min高壓滅菌后，每個(gè)藥物濃度梯度做兩組平行試驗(yàn)。對(duì)照組為不加中藥的MHB培養(yǎng)基。取已制備好的菌懸液2μL點(diǎn)種于滅菌后的藥敏培養(yǎng)基平板上，將接種好的平板放置28℃恒溫培養(yǎng)，分別記錄24h后藥板上菌落的生長(zhǎng)情況最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC），48h后觀察藥板上菌落的生長(zhǎng)情況最低殺菌濃度（minimum bactericidal concentration，MBC）值。若兩個(gè)平行組的MIC值或MBC值不一致，試驗(yàn)需重做以進(jìn)一步確定最終MIC值和MBC值。
2 結(jié)果與分析
不同提取方法的抑菌作用比較
表1至表3結(jié)果表明：用每種方法提取的黃芩粗提物對(duì)9 株常見(jiàn)病原菌均有一定的抑制作用，但超聲提取效果最好，其平均最低抑菌濃度為2.16mg/ml；旋蒸提取抑菌作用最差。
表1 黃芩超聲提取藥液對(duì)9株致病菌抑菌、殺菌效果（mg/mL）
表2黃芩索氏提取藥液對(duì)9株致病菌抑菌、殺菌效果（mg/mL） 
表3黃芩旋蒸藥液對(duì)9株致病菌抑菌、殺菌效果（mg/mL）
3 結(jié)論
本文采用的三種不同方法提取的黃芩粗提物對(duì)9 株常見(jiàn)病原菌均有一定的抑制作用，但超聲提取效果最好，其平均最低抑菌濃度為2.16mg/ml；旋蒸提取抑菌作用最差。索氏提取方法的抑菌效果較超聲方法低，優(yōu)于旋蒸提取法。
