0％磷酸水溶液通過酸反應(yīng)和強表面活性劑／洗滌劑的共同作用，可以有效地清潔不銹鋼及其它潤濕的部件。這一方法比更常用的硝酸“鈍化”絕對更有效、且較少損害(特別是對日常使用低紫外波長的應(yīng)用來說)。這一磷酸清洗步驟不是起鈍化作用，但它是系統(tǒng)鈍化前清洗的第一步。
一般來說，對于陽離子的離子色譜分析或配有氧化方式的電化學(xué)檢測器以外的應(yīng)用不需要鈍化系統(tǒng)。因為有真空脫氣機(jī)(每個通道體積為8m1)，可不必用磷酸；中洗全部通道。如果你計劃四個通道都要用，則可用濕灌注的方式以4mL／min流速對每個通道清洗8～1 O分鐘來清洗脫氣機(jī)。這一步完成后你必須徹底淋洗管路，用水淋洗2～3次以便將磷酸從溶劑過濾頭等部件沖洗凈。
安裝好的HPLC系統(tǒng)的酸清洗和鈍化
HPLC系統(tǒng)內(nèi)部可能的污染物來自人的觸摸，暴露在實驗室化學(xué)環(huán)境，與零部件制造相關(guān)的殘留物，或來自先前的流動相和樣品的殘余物。
雖然系統(tǒng)自身也會逐步地被流動相清洗，但某些釋放出的雜質(zhì)會吸附在色譜柱上以及檢測器潤濕的表面上，因而會降低總的性能。
磷酸清洗：
通常用于從系統(tǒng)中除去有機(jī)雜質(zhì)?？赡苁怯捎谙礈熳饔?，它似乎比強有機(jī)溶劑更好也更快。這一步清洗必須在硝酸鈍化之前完成。
硝酸鈍化：
實際上是作用于不銹鋼表面，在表面上生成均勻的氧化層。這層氧化膜保護(hù)不銹鋼免受腐蝕(鹵化物，螯合劑，等等)并且盡量減少浸出的金屬離子進(jìn)入流動相。
以下應(yīng)用需要在使用前做磷酸清洗和硝酸鈍化，包括：
①所有的氨基酸分析系統(tǒng)；
②所有包含電化學(xué)檢測器的系統(tǒng)；
③所有要分析無機(jī)陽離子，包括過渡金屬的系統(tǒng)；
④所有利用柱后添加衍生試劑或絡(luò)合樣品組分的系統(tǒng)。
以下應(yīng)用需要在使用前只做磷酸清洗，包括：
①所有常規(guī)用途的、可能在低pH環(huán)境下在低紫外檢測波長下運行的HPLC系統(tǒng)；
②所有需要高靈敏度性能的梯度紫外檢測系統(tǒng)。
系統(tǒng)清洗指南：
注意：在實行這個程序時采用適當(dāng)?shù)陌踩雷o(hù)措施準(zhǔn)備工作：
首先，摘下色譜柱，用兩通或接頭取代色譜柱。在實行這一清洗步驟時，如果有可能選擇監(jiān)測的紫外波長為：254nm。通過軟件或移去電纜的方式取消紫外檢測器的自動回零功能。
具體步驟：
1．用甲醇徹底沖洗系統(tǒng)，以等比例方式通過泵的所有管路。
2．用水徹底沖洗系統(tǒng)，以等比例方式通過泵的所有管路。
3．以等比例方式通過泵的所有管路導(dǎo)入～30％v／v磷酸水溶液。以1mL/min流速洗大約一個小時。在沖洗期間活動所有的閥，包括：參比閥、進(jìn)樣閥及旁路閥等等。
4．用水徹底沖洗所有管路和系統(tǒng)。
必要時用6N硝酸(HN03)重復(fù)以上步驟。否則，跳到第7步。注意：硝酸是一個強紫外吸收溶液。除非絕對需要，不要做鈍化程序。
5．以等比例方式通過泵的所有管路導(dǎo)人6N硝酸水溶液(大約是40％)。以1mL/min流速洗大約一個小時。
6．用水徹底沖洗系統(tǒng)，仔細(xì)檢查是否有任何滲漏，在沖洗期間反復(fù)活動所有的閥，包括：參比閥、進(jìn)樣閥及旁路閥等等。
注意：如果你要用低于270nm的紫外波長作檢測，則需要更大量水的清洗過程，不斷的換新鮮水并活動各個閥(沖洗進(jìn)樣器，等)以便從系統(tǒng)中除去所有的痕量硝酸根離子。硝酸清洗后經(jīng)常在幾天之內(nèi)都會觀察到在低紫外波長下有負(fù)的基線漂移。勤換水和有耐心是盡快消除紫外本底的關(guān)鍵。
7．返回到甲醇洗，然后繼續(xù)用實驗所需的溶劑沖洗。
8．通過軟件或接上電纜的方式重新使紫外檢測器的自動回零功能恢復(fù).
