一、波長最大允許誤差與重復性檢定需要注意的事項
波長最大允許誤差檢定即檢定波長準確度，是指掃描標準樣品或標準濾光片時，儀器測得的光譜峰的波長值與該峰的標準值的符合程度。波長準確度誤差隨儀器不同一般在(±0.2～±1)nm之間。JJG178-2007《紫外、可見、近紅外分光光度計》檢定規(guī)程提供了9種標準物質供選擇，實際檢查波長準確度常用的方法是用儀器光源氘燈的發(fā)射譜線、用汞燈的發(fā)射譜線、用鐠釹濾光片或鈥濾光片的吸收峰檢查。氘燈在波長小于365nm的紫外區(qū)沒有分立的譜線，波長大于365nm部分譜線分立得較清楚，但強度較大的不多，其中486.0nm和656.1nm兩條比較好，可以用來檢查波長準確度。汞燈在紫外區(qū)和可見區(qū)具有多條分立的譜線，是校準分光光度計的良好工作基準，但操作起來較麻煩。由于汞燈不是儀器的光源，需要將汞燈點燃固定到能照入單色器的某一位置，使它發(fā)出的光明亮均勻地照射在單色器準直鏡和光柵上，盡量居中充滿。較常用的汞燈譜線是546.1nm。鐠釹濾光片或鈥濾光片使用較方便，是日常檢定使用最多的。鐠釹濾光片在波長小于400nm時沒有吸收峰，而且吸收峰也不尖銳，鈥濾光片具有較完整的波長吸收峰值點，根據實際檢定情況來看，在(200～700)nm波長之間用鈥濾光片、在(700～900)nm波長之間用鐠釹濾光片效果最好。波長重復性是指同一吸收峰或發(fā)射譜線進行多次重復掃描時峰值波長測量結果的重復程度，它反映了掃描機構的制造準確度及轉動誤差，一般重復性的誤差比波長準確度誤差要小，約為波長準確度誤差的一半。
二、透射比最大允許誤差與重復性檢定需要注意的事項
透射比最大允許誤差反映了儀器測光準確度，是指儀器在吸收峰值上讀出的透光率(吸光度)與已知真實透光率(吸光度)之間的偏差。測光重復性是指操作者在一次開機中連續(xù)重復測量某一吸收峰值的透光率(吸光度)之重復程度。紫外分光光度計的測光準確度隨儀器和測量范圍不同而不同，一般為±0.0015A～±0.0005A。測光重復性一般為±0.001A～±0.002A。檢定透射比最大允許誤差的方法有兩種:一種是標準溶液法；另一種是標準濾光片法。在實際檢定過程中使用標準濾光片較多，經常會發(fā)現(xiàn)透射比示值超差的現(xiàn)象，其實是假超差占絕大多數。原因可能有兩個:一是該儀器生產時比色皿架的安裝有微小偏差(不影響工作的正常使用)；二是某個光譜中性濾光片的外殼出現(xiàn)細微變形 (不影響正常檢定)。這兩種情況均會造成透射比示值偏離實際測量值，形成不合格假象，容易引起誤判。
三、最小光譜帶寬、噪聲與漂移、基線平直度檢定需要注意的事項
在紫外可見分光光度計檢定中，人們利用儀器自身光源(氫燈或氘燈)的特征發(fā)射光譜線作為“譜寬”，以單光束方式通過設定的狹縫后單色光的峰波的半幅度作為“譜寬”，以最小可設定狹縫下測得的譜寬作為儀器的“分辨力”。采用光柵為單色器的非記錄型單光束紫外可見分光光度計(如WFZ-800D)，測試時可先將狹縫撥至0.5mm擋，開啟氘燈及光電倍增管電源，波長旋至656nm附近，粗調透射比約為50%T，再微調波長旋鈕使透視比讀數至最大，記下數值。左右偏調波長旋鈕，使透視比讀數至最大，記下數值，找出接近該峰值之半的兩個波長，其差值即為譜寬(nm)。采用光柵、雙光柵或棱鏡-光柵為單色器的自動記錄式紫外可見分光光度計(如島津UV-365、日立U-3200等)，測試時先設定在單光束方式，以氘燈為光源，在656nm附近掃描，能量檔次隨設定狹縫作相應調整，使峰高為(30%～80%)T，打印出光譜圖，用游標卡尺量出峰高值，再找出半峰高相應的兩個波長，量出譜寬或最小譜寬即分辨力。噪聲與漂移主要檢查儀器隨時間增長而引起元器件溫度、外電源等的變化給儀器帶來的影響。一臺有良好穩(wěn)定性的儀器應該由漂移和吸光度的重復性共同構成，二者缺一不可?；€平直度反映的是每個波長上的光度噪聲，是重要的技術指標之一，同時也是主要分析誤差的來源之一，它決定紫外可見分光光度計在各個波長下的分析檢測濃度的下限。影響基線平直度的因素很多，例如:濾光片或光學元器件上有灰塵，會產生散射，從而引起基線平直度變壞；濾光片未安裝好，用于不同波段不同的濾色片切換時會產生噪聲，使基線平直度變壞；氘燈和鎢燈切換時產生噪聲；掃描速度太快也會引起平直度變壞等。
四、關于雜散光的問題
紫外可見分光光度計的雜散光指標決定了儀器的可靠性和檢測靈敏度，過大的雜散光不但會淹沒小吸收峰，造成光譜圖線條的連續(xù)不光滑，還會降低儀器的測光準確度。雜散光是指到達接收器的除規(guī)定定義波長以外的其他波長的光，它以兩種形式出現(xiàn):第一種是雜散光波長與測量波長相同，可能不通過樣品就射到檢測器上，引起的原因是由于各種光學機械零件和樣品本身反射和散射。第二種雜散光是測定波長以外的偏離正常光路到達檢測器的光線，它通常是由光學系統(tǒng)的缺陷引起的，如不必要的反射面、光束孔徑不匹配、灰塵的散射、光學表面的擦痕，光學系統(tǒng)的像差等。通常所指的雜散光是第二種雜散光。雜散光檢定可采用標準溶液法和標準濾光片法，一般實際檢定大多數采用標準濾光片法。雜散光的比例在光強強度、光譜透光率的檢測器的靈敏度等級較低時變大，所以在紫外分光光度計中應當首先檢定(200～220)nm區(qū)域的雜散光。
五、結束語
以上主要介紹了檢定紫外可見分光光度計主要技術指標的心得體會，包括波長最大允許誤差與重復性、透射比最大允許誤差與重復性、最小光譜帶寬、噪聲與漂移、基線平直度、雜散光等。此外，也不應忽視吸收池配套性和電源電壓適應性的影響，它們會給使用帶來誤差，從而影響分析結果。在具體使用紫外可見分光光度計時還要懂得儀器的日常維護，如應具備四季恒濕的儀器室、配置恒溫設備、定期清潔、保障環(huán)境和儀器室內衛(wèi)生條件、防塵等，只有這樣才能保證儀器始終工作在最佳狀態(tài)。
