【實驗原理】
17-酮類固醇(17-ketosteroids，17-KS)是腎上腺皮質激素及雄性激素的代謝產物，它們都是環(huán)戊烷多氫菲的衍生物，在第17位碳原子上都有一酮基。這類化合物主要為雄酮、表雄酮、去氫表雄酮和原膽烷醇酮等，大部分結合成為水溶性的葡萄糖醛酸酯或硫酸酯。17-KS必須經過酸水解成游離的類固醇后，再用有機溶劑提取，經過洗滌除去酸類與酚類物質，利用17-KS分子結構中酮-亞甲基(一CO—CH2一)能在堿性溶液中與問二硝基苯作用生成紫紅色化合物(Zimmermann反應)，在520nm波長處有一吸收峰，可與標準液同時操作進行比色測定。
【試劑與器材】
1．濃鹽酸(AR)
2．乙醚(AR)
3．去醛乙醇無水乙醇1000ml，加入4g鹽酸問苯二胺，充分混勻后，暗處靜置1周，每天振搖2次，到期進行蒸餾，棄去開始餾出與最后剩余部分各50ml，收集中間部分所得乙醇，置棕色瓶中保存。
4．0．12mol/L間二硝基苯乙醇溶液稱取純化的間二硝基苯2g，溶于去醛無水乙醇內，定容至100ml。冰箱避光保存。
間二硝基苯必須重結晶提純，處理方法如下：取間二硝基苯20g，加95%乙醇150ml，加溫至40℃，使其溶解。加2mol／L NaOH溶液100ml，靜置5分鐘。在室溫下徐徐加蒸餾水2500ml，邊加邊搖，靜置即可出現針狀白色結晶，用布氏漏斗收集沉淀，并用蒸餾水洗滌后吸干，沉淀用無水乙醇80～120ml再結晶2次，純化的結晶潔白無色，熔點90．5～9l℃。
5．100μg／ml雄酮標準溶液將雄酮(GR)置于干燥器中至少48小時，精確稱取雄酮10mg，置于100ml容量瓶中，用去醛乙醇溶解并定容。此液不能久存，必須分裝于潔凈的中號試管中，每管0．2ml(含20μg)，置37℃溫箱中烘干，置暗處保存，每次測定時取出一管使用。
6．5mol／LKOH溶液
7．70％去醛乙醇溶液取去醛乙醇70ml，加蒸餾水至100ml。
8．2mol／L NaOH溶液
9．儀器分光光度計。
【操作步驟】
1．標本收集 收集24小時尿液于潔凈的容器中，預加濃鹽酸5ml防腐，并記錄尿液總量。
2．水解 取24小時混合尿液5ml，置試管中，加濃鹽酸1．5ml，在沸水中煮沸20分鐘，取出，置冷水中冷卻。
3．提取 將上述水解液倒入30m1分液漏斗中，加乙醚約10ml，振搖2分鐘，靜置分層以后，棄下層尿液，加5ml 2mol／L NaOH于分液漏斗中，振搖1分鐘，以除去酸性酚類干擾物質，靜置分層后，棄去下層NaOH液，再加蒸餾水5ml洗滌2次，棄去下層水液，于40～45℃水浴中蒸干。此管即為測定管。
4．標準管 取上述分裝于15mm×150mm試管中烘干的標準管一支作標準管。
5．顯色 取測定管、標準管、空白管3支試管
各管混勻，1000r／min離心5分鐘，上層液移入比色杯中，在波長520nm處，以空白管調零，讀取各管的吸光度。
